アデノウイルス発現ベクターを用いたp16遺伝子導入による食道癌、膵癌治療の試み

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09671280
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 小林 進 千葉大学, 医学部, 講師 (50234828)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 白澤 浩 千葉大学, 医学部, 教授 (00216194)
• Keywords: p16 / アデノウイルスベクター / 遺伝子導入 / 膵癌 / 食道癌

Research Abstract

p16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターの作製と発現の確認(In vitro)
昨年は開始コドン前約10塩基、終止コドン後約30塩基をつける形で組み込むべきp16^<INK4>cDNA(0.8kb)をPCRによりcloningし、これをコスミッドカセットDNAのSwa-1siteにIn vitro pachagc法により組み込み、さらに、これをEco T22Iにて切断された親アデノウィルスと293細胞にco-transfectし、組換えウィルスを分離しp16^<INK4a>発現アデノウイルスベクターを作製した。またp16^<INK4a>遺伝子のhomozygous deletion が確認された膵癌培養細胞(MIAPaca-2)において、上記の発現ベクターによる遺伝子導入によりp16^<INK4a> mRNAの高度の発現がNorthern Blot Hybridizationにより確認できたことを報告した。本年度はさらにWestern Blot Hybridizationを行ったが、実際に上記の遺伝子導入によりMIAPaca-2においてp16^<INK4a>遺伝子のタンパクレベルの発現が見られることを確認し、さらにその細胞においてアポトーシスが誘導されることも確認した。
p16^<INK4a>発現による膵癌、食道癌細胞増殖抑制効果
昨年は遺伝子導入によりp16^<INK4a>発現が確認された膵癌培養細胞(MIAPaca-2)はコントロール(MIAPaca-2)細胞に比較し、その細胞増殖は有意に抑制されることを確認したが、本年度さらに食道癌細胞(TT,TTn)において細胞増殖抑制効果を検討した。しかし膵癌細胞と異なり、有意な細胞増殖抑制効果は見られなかった。現在その要因につき検討中である。

Research Products

• [Publications] Susumu Kobayashi,et al: "Adenorirus p16 Expression Vector to Suppress the parcreas Cancer Cells Proliferation" Hepato-gastroenterology(Spplement II). 45. CLXII (1998)
• [Publications] 小林 進 他: "大腸癌におけるp21^<WAF1/CIP1>遺伝子のmRNA発現" 日本外科学会雑誌. 99・7. 457-462 (1998)