水頭症に対する神経成長因子ファミリーの補充療法の基礎研究

1999 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09671452
• Research Institution: Tokai University
• Principal Investigator: 篠田 正樹 東海大学, 医学部, 講師 (70196393)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大井 静雄 東海大学, 医学部, 助教授 (30194062) ; 日高 充 東海大学, 医学部, 助手 (90256123) ; 田中 佳子 東海大学, 医学部, 助手 (20227193) ; 津金 隆一 東海大学, 医学部, 教授 (70022902)
• Keywords: ミクログリア / 神経成長因子 / 水頭症 / NGF / 神経免疫 / MHC class II / MHC class I

Research Abstract

(1)150gのfemale Fisher344ratを使用。pentobarbital麻酔下(40mg/kg)、項部を縦切開し、12.5mg/0.1mlのkaolinを大槽内に注入した。Oxycel^<【○!R】>にて充填後、閉創。
(2)初回手術1週間後、再びpentobarbital麻酔下(40mg/kg)、Alzet社製のOsmotic Minipump2000にてcerebral infusion kitを使用し、control群はcytochrome-c 20μg、Neurotrophin群は2.5s mouse NGF(recombinant)20μgの持続注入を開始した。
(3)初回手術4週間後Pentobarbital(80mg/kg)皮下注射にて麻酔後、開胸、上行大動脈より、4%paraholmaldehyde液にて灌流固定を行った。sucroseにて洗浄を施行し、凍結後切片作製した。
(4)Monoclonal antibody として、CD4(clone W3/25,Pharmingen^<【○!R】>),CD8(clone OX-8,Serotec^<【○!R】>),Major histocompatibility complex(MHC)class I (clone OX-18,Secrotec^<【○!R】>),MHC class II (clone OX-6,Serotec^<【○!R】>),interleukin(IL)-2 receptor(CD25;clone OX39,Serotec^<【○!R】>),CD45RA(clone OX33,Serotec^<【○!R】>),Complement receptor type 3(CR-3;clone OX-42,Pharmingen^<【○!R】>),ED1,Methyl green 染色を用い組織染色を行った。
(5)現在全例においての組織染色法が終了していないが,NGF投与例においてmicroglial proliferationの所見がやや少ないように観察されている。

Research Products

• [Publications] Masaki Shinoda etal.: "NGF,NT-3 and TrkC in RNAs But Not Trk in RNA are Upregulated in Grey and White Matter in Experimental_Hydrocephalus"Experimental Neurology(Suppl). (印刷中).
• [Publications] 篠田正樹他: "中枢神経系におけるmicrogliaの発生"小児の脳神経. 24(5). 453-456 (1999)