1997 Fiscal Year Annual Research Report
排卵と活性酸素…生殖器における活性酸素関連遺伝子,排卵酵素遺伝子の制御…
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09671683
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
佐々木 順造 岡山大学, 医学部, 教授 (30093686)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
野村 貴子 岡山大学, 医学部, 助手 (20116437)
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| Keywords | in situ ハイブリダイゼーション法 / 排卵 / 活性酸素 / Mn-SOD / 排卵酵素 / 合成プローブ |
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| Research Abstract |
排卵現象における活性酸素の役割を検討する目的で、活性酸素関連遺伝子を中心に、いわゆる排卵酵素遺伝子や排卵現象に関与する様々な分子の遺伝子発現について、in situハイブリダイゼーション法を試みた。動物については、正常ラットおよびマウスのほか、アカタラセミアマウス、ヒポカタラセミアマウスなど、カタラーゼを欠損し、スーパーオキシドディスムターゼ(SOD)によって活性酸素からつくられる過酸化水素を処理できない遺伝子欠損のマウスを準備し、排卵誘発実験後、ビタミンE欠乏食実験後や発情周期各相に、卵巣を採取した。プローブについては、pGEM4Zベクターに組み込まれたcDNAよりジゴキシゲニン-UTP又は^<35>S-UTPを組み込んだSenseおよびAntisenseのプローブを作成したが、排卵酵素のcDNAは入手困難であったため、合成プローブの新しい作成法を試みた。この方法は、論文から得たセンスおよびアンチセンスの配列の両端にEcoR IおよびHind IIIを認識する配列をもつ、合計99-merの長さの合成DNAを得て、これをもとにセンスまたはアンチセンスプローブの合成用鋳型DNAを作成する方法である。最近ではEcoRI/HindIIIカットされた状態の配列で、5'リン酸化した2本の相補的な配列を持つ合成DNA(5'-AATTC--------------------A-3'と3'-G--------------------TTCGA-5)の凍結乾燥品を得て、同様の方法でプローブを作成している。多くの標識が挿入され、高感度での検出が可能となった。この方法により、Mn-SOD、コラゲナーゼなど必要なプローブを一部既に合成し、また、グルタチオンペルオキシダーゼ、カタラーゼ、プラスミノーゲンアクチベータ、カリクレイン等については合成の途中にある。
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[Publications] 佐々木順造: "ラット卵巣におけるMn-SODmRNAの発現" Mebio. 14・1. 115-118 (1997)
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[Publications] Hanada,H.: "Do reactive oxygen species underlie the mechanism of apoptosis in the tadpole tail ?" Free Radical Biology and Medicine. 23・2. 294-301 (1997)
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[Publications] Futami,J.: "Tissue-specific expression of pancreatic-type RNases and RNase inhibitor in humans." DNA and Cell Biology. 16・4. 413-419 (1997)
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[Publications] Yamamoto,H.: "uetrastructural and histochemical changes and apoptosis of inner enamel epithelium in nat enamel-free area." J.Craniofacial. Genetics and Developmental Biolgy. (in press). (1998)
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[Publications] Yamamoto,H.: "Characterization of the inner enamel opithelium in the enamel-free area based on the ability to secrete enamel protein demonstrated by in situ hybridization and immunohistochemistry." Acta Anat.(in press). (1998)
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[Publications] Sasaki,J.: "Multiple-labeling of oligo nucleotide probes for in situ hybridization." Acta Histochem.Cytochem.(in press). (1998)
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[Publications] 佐々木順造: "「フリーラジカルの臨床」排卵と活性酸素-生殖器における発現から見たMnSODの役割" 日本医学館, 117 (1997)
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[Publications] 佐々木順造: "「電子顕微鏡基礎技術と応用1997-ナノ世界への道」Insitu ハイブリダイゼーション法" 学際企画, 240 (1997)
