1998 Fiscal Year Annual Research Report

受精成立における卵子・精子のインターアクション機構の研究

Research Project

Project/Area Number	09671714
Research Institution	Keio University
Principal Investigator	末岡浩慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (90162833)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	土屋慎一慶應義塾大学, 医学部, 助手 (70276327) 篠原雅美慶應義塾大学, 医学部, 助手 (10276321) 吉村泰典慶應義塾大学, 医学部, 教授 (10129736)
Keywords	cell-free精子核脱凝縮 / ジスルフィド結合 / lysolecithin / dithiothreitol(DTT) / ヒストンH2B / プロタミン / tapering sperm
Research Abstract	精子核のcell-free脱凝縮実験系を用いて、受精過程においてヒト精子核膨化機構に関与する精子核タンパクについて検討した。塩の存在(Na^+で1.0M以上)、細胞膜の除去、ジスルフィド結合還元という条件を満たす、0.05%lysolecithin-5 mM dithiothreitol(DTT)-1.0 M NaCl Tris溶液によるcell-free精子核脱凝縮実験系を作製した。この系を用いて成熟精子核におけるヒストンの存在を示し、また抗ヒストン抗体を用いて蛍光下で膨化精子核の経時変化を検討した。ヒト精子核を上記in vitro脱凝縮系で膨化させ、35%酢酸溶液により塩基性核蛋白を抽出した。抽出蛋白に対し抗ヒトヒストンH2Bポリクローナル抗体を使用したWestern blottingによる検索では、精子形成過程で核蛋白のほとんどがブロタミンに置換されるという過去の報告に反し、相当量の抗ヒストンH2B抗体に結合する蛋白バンドが検出された。抗ヒストンH2B抗体およびFITC標織2次抗体を使用して蛍光下で精子核の脱凝縮過程を検討した。この方法により光顕的には観察が不可能であった膨化精子核が明瞭に観察可能となった。0.05%lysolecithinにより膜成分を除去した精子核に5mM dithiothreitol(DTT)-1.0 _M NaCl Tris溶液を添加することで脱凝縮を開始させると添加直後から精子核の径の増加が確認され、3分後には精子核の径が2倍以上となる完全膨化を示した。10分後には精子核は球状にまで変化した。また、この脱凝縮過程において蛍光強度の増加が確認された。肢凝縮に伴い、結合可能なヒストンの量に変化があったことが示唆された。しかし、精子形態により膨化に差を認め、tapering Spermでは膨化の径の変化が有意に少ないことが判明した。精子核はその成熟過程で核蛋白がヒストンからプロタミンに置換され形態的機能的にコンパクトとなるが、射出精子核にも相当量のヒストンを含有しており、また脱凝縮過程でヒストンの結合性に変化を生じることが示唆された。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] K.Sueoka: "Integrins and reproductive physiology: expression and modulation in fertilization, embryogenesis, and implantation" Fertility & Sterility. 67(5). 799-811 (1997)
[Publications] 末岡浩: "精子核の膨化" 産婦人科の世界. 49(5). 33-40 (1997)
[Publications] 末岡浩: "初期胚の遺伝子診断" 産婦人科の世界. 49(7). 35-43 (1997)
[Publications] 黒島正子: "初期胚における染色体異常の発生頻度と胚発生過程でのembryo lossに関する一考察" 産婦人科の実際. 47(8). 1199-1203 (1998)
[Publications] 岩田壮吉: "卵細胞質抽出物によるcell-free系精子核脱凝縮モデルの検討" 日本受精着床学会雑誌. 15(1). 98-101 (1998)
[Publications] 篠原雅美: "c-kit陽性spermatogoniaのフローサイトメトリー分析" 日本受精着床学会雑誌. 15(1). 102-104 (1998)
[Publications] 末岡浩: "新女性医学大系 II.「生殖・内分泌」部門 15.不妊・不育" (株)中山書店, 414 (1998)
[Publications] 末岡浩: "不妊症診療ハンドブック (印刷中)" (株)中外医学社, (1999)

1998 Fiscal Year Annual Research Report

受精成立における卵子・精子のインターアクション機構の研究

Principal Investigator

末岡 浩 慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (90162833)

Research Products

[Publications] K.Sueoka: "Integrins and reproductive physiology: expression and modulation in fertilization, embryogenesis, and implantation" Fertility & Sterility. 67(5). 799-811 (1997)

[Publications] 末岡 浩: "精子核の膨化" 産婦人科の世界. 49(5). 33-40 (1997)

[Publications] 末岡 浩: "初期胚の遺伝子診断" 産婦人科の世界. 49(7). 35-43 (1997)

[Publications] 黒島正子: "初期胚における染色体異常の発生頻度と胚発生過程でのembryo lossに関する一考察" 産婦人科の実際. 47(8). 1199-1203 (1998)

[Publications] 岩田壮吉: "卵細胞質抽出物によるcell-free系精子核脱凝縮モデルの検討" 日本受精着床学会雑誌. 15(1). 98-101 (1998)

[Publications] 篠原雅美: "c-kit陽性spermatogoniaのフローサイトメトリー分析" 日本受精着床学会雑誌. 15(1). 102-104 (1998)

[Publications] 末岡 浩: "新女性医学大系 II.「生殖・内分泌」部門 15.不妊・不育" (株)中山書店, 414 (1998)

[Publications] 末岡 浩: "不妊症診療ハンドブック (印刷中)" (株)中外医学社, (1999)

末岡浩慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (90162833)

[Publications] 末岡浩: "精子核の膨化" 産婦人科の世界. 49(5). 33-40 (1997)

[Publications] 末岡浩: "初期胚の遺伝子診断" 産婦人科の世界. 49(7). 35-43 (1997)

[Publications] 末岡浩: "新女性医学大系 II.「生殖・内分泌」部門 15.不妊・不育" (株)中山書店, 414 (1998)

[Publications] 末岡浩: "不妊症診療ハンドブック (印刷中)" (株)中外医学社, (1999)