1997 Fiscal Year Annual Research Report
神経芽腫の生物学的因子としての神経特異的src遺伝子の定量的解析
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09671826
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
大沼 直躬 千葉大学, 医学部, 教授 (50125910)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉田 英生 千葉大学, 医学部, 講師 (60210712)
田辺 政裕 千葉大学, 医学部, 助教授 (10207160)
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| Keywords | 予後因子 / 神経特異的src遺伝子 / RT-PCR |
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| Research Abstract |
1,RT-PCRに必要なprimerを、src DNA exon3,eson4にそれぞれデザインし、合成した。デザインは、コンピューターを用いて行い、c-srcN2ha196bp、c-sfcN1は、163bp、c-srcは145bpのproductsとなる様にした。
2,神経芽腫細胞株RT-BM-1を用い、PCRの予備実験を行った。PCR productsは予測されるサイズに、5% アガロースゲルの上で分離、同定された。exon3に存在するHinc II siteを利用して、PCR productsを消化したところ、予測される制限酵素切断パターンをとった。また、PCR products をナイロンフィルターに移りとり、我々がクローニングしたヒト src cDNAをプローブにSouthern blot hybridezation を行ったところ、強いシグナルが得られ、PCRの特異性も確認できた。
3,PCRの最適反応条件を決定した後、増幅回数を多段階に設定し、PCR productsの指数的増幅が得られる条件を確定した。PCR prodectsの定量はKodak digital science DC40 camera と 1D Image Analysis Application program(Eastman Kodak,Rochester,NY)にて行った。10種類の神経芽腫細胞株ならびに、神経芽腫細胞株RT-BM-1のレチイノン酸分化誘導前後の状態においての3種類のsfc mRNAの発現を、Slnuclease protection asay と RT-PCRで比較したところ、両実験系はよく相関し、RT-PCRの定量性を確認することができた。
神経芽腫
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[Publications] Naomi Ohnuma: "The role of ERCP in biliary atresia" Gastrointest.Endosc.45. 365-370 (1997)
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[Publications] Naomi Ohnuma: "Endoscopic varieal ligafion using aclipping apparatus in children with potal hypertension" Endoscopy. 29. 86-90 (1997)
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[Publications] Naomi Ohnuma: "Endoscopic retrograde chelangiopan creatography (ESCP)in biliary tract desease of infants less than one year old" Tohoku J Exp Med. 181. 67-74 (1997)
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[Publications] 大沼直躬: "小児の原発・転移性肺悪性固形腫瘍の治療-転移性肺腫瘍の放射線治療-" 小児外科. 29. 1466-1470 (1997)
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[Publications] 大沼直躬: "胆体閉鎖症術後の肝門部の内視鏡的治療と再術の適応" 小児外科. 29. 917-922 (1997)
