1998 Fiscal Year Annual Research Report
ラット骨芽細胞における細胞骨格遺伝子アクチンmRNAの細胞内分布及び輸送機構
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09671870
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| Research Institution | Tokyo Dental College |
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Principal Investigator |
渡邊 弘樹 東京歯科大学, 歯学部, 講師 (00158651)
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| Keywords | 細胞骨格 / 骨芽細胞 / 大理石骨病 / mRNA / in situ hybridization / 培養細胞 / 光学顕微鏡 / 遺伝子輸送 |
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| Research Abstract |
細胞内における各種mRNAの発現有無については最近多くの研究がなされているが、mRNAの細胞内局在についてはほとんど知られていない。そこで本研究は、beta-actin mRNAおよびgamma-actin mRNAのprobeを用い、正常ラット頭蓋骨骨芽細胞における各種actin mRNAの細胞内局在分布についてIn situ hybridization法を用い検討した。検討するにあたり骨芽細胞の培養細胞を用いるため、正常及び大理石骨病モデルラット(tl/tl)、において、頭蓋骨より骨芽細胞を分離し初期培養(Jackson et al.J.Cell Biochem.55 366-372 1994の方法)を行った。In situ hybridization法のための試料には、培養3,5日目のものを用いた。前処理後、50%formamideでincubateし、その後はbeta及びgamma-actinmRNA Probeを含むbuffer液にてhybridizationを行った。anti-digoxigeninmouse IgG-AP conjugateを使いincubate後、染色、封入後、光顕観察を行った。(1) (昨年までの結果)正常骨芽細胞では、beta-actin mRNAは細胞突起、細胞膜周辺部、さらに細胞の核周辺一方向のみの細胞質部分にシグナルが観察され、gamma-actin mRNAは核周囲全周にシグナルが観察された。これらの結果から、正常骨芽細胞ではbeta-actin mRNAとgamma-actin mRNAとはそれぞれ細胞内局在部位が異なることが明らかになった。一方大理石骨病ラットの骨芽細胞では、beta-actin mRNAおよびgamma-actin mRNA共に細胞内ではdiffuseに分布し、細胞内局在化が崩れていた(J.Ce11 Sci.111.1998)。
(2) (本年度結果)csf-1投与後大理石骨病モデルラットの培養骨芽細胞のbeta及びgamma-actin mRNAの局在化について、ISH法を用いて検索した。その結果beta-actin mRNAについては、control群のmRNA局在部位に回復していた。一方gamma-actin mRNAについてはdiffuseで回復していなかった。以上の結果より大理石骨病モデルの骨芽細胞では、上記各mRNAの細胞内輸送機構において、csf-1がbeta及びgamma-actin mRNA輸送において異なる作用をもつ可能性が示唆された。来年度はこれら機構異常を解明するため、統計学的に検討したい。
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[Publications] Hiroki Watanabe: "Ultrastructural evidence abnormally short and maldistri-buted actin stress fibers in osteopetrotic(toothless ti)rat osteoblasts in situ after detergent pertusion." Tissue and Cell. 29,1. 89-98 (1997)
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[Publications] Hiroki Watanabe: "Actin mRNA isoforms are differentially sorted in normal osteoblasts and sorting is altered in osteoblasts from a skeletal mutation in the rat" Journal of Cell Science(J.Cell Sci.). 111. 1287-1292 (1998)
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[Publications] Y.Ouchi: "Attachment of the spheno-mandibular ligament to bone during intrauterine embryo development for the control of mandibular movement" Bull Tokyo Dent Coll. 30,2. 91-94 (1998)
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[Publications] S.Abe: "Histological study of the healing process of the attachment site of rat masseter muscle following injury" Bull Tokyo Dent Coll. 39,3. 217-220 (1998)
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[Publications] 佐々木順造: "電子顕微鏡基礎技術と応用1997 In situ hybridization法" 学際企画(日本電顕学会編), 154-161 (1997)
