1998 Fiscal Year Annual Research Report

軟骨組織におけるRGD構造を持つコラーゲン結合蛋白(RGD-CAP)の発現と機能

Research Project

Project/Area Number	09671894
Research Institution	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)(2)
Principal Investigator	能城光秀広島大学, 歯学部, 助教授 (00144858)
Keywords	コラーゲン / インテグリン / 軟骨基質 / クローニング / 軟骨細胞培養 / 細胞接着 / RGD-CAP
Research Abstract	本研究は,細胞とコラーゲンとの相互作用を仲介する蛋白としてのRGD-CAPの軟骨細胞増殖分化における役割探究を目的としており,これまでに以下のことを明らかにした。 (1) ニワトリ胸骨軟骨cDNAライブラリーからRGD-CAPの完全長cDNAを単離し,全塩基配列を決定した。ニワトリRGD-CAPのcDNAは680個のアミノ酸に翻訳され,4つの繰り返し構造を持ち,またC端近傍にはインテグリン認識部位であるRGD配列が存在した。 (2) recombinantRGD-CAP蛋白を大腸菌で発現させ、それに対する抗血清を用いたWestern blot法によってニワトリ胸骨軟骨培養細胞について調べた結果、Conditioned Medium中でのRGD-CAP量はTGF-β添加により経時的に増加し,先にブタ軟骨細胞で観察されたTGF-βによるmRNAの増加と一致した。ニワトリ胚の頚椎において軟骨が分化する過程でRGD-CAPは基質形成層から肥大層にかけて多く分布していた。 (3) I型、II型,III型,V型コラーゲンを共存下でrecombinant RGD-CAPのウサギ関節軟骨細胞の伸展に対する影響と初期接着に対する影響を検討したところ,細胞の初期接着にはRGD-CAPとコラーゲンはそれぞれ独立して作用するが、細胞伸展には両者が協調的に作用して細胞外基質の高次構造を改変し、効果を発揮していると考えられた。 (4) これらの作用はEDTAで阻害され、2価の金属イオンにより亢進し,RGD-CAPの細胞接着及び細胞伸展促進作用はインテグリンを介すると推察された。 (5) 各種,抗インテグリン抗体を用いた実験により、RGD-CAPは細胞と直接結合し,細胞膜上のレセプターとしてα1,α5,β1インテグリンを介することがすることが判明した。 (6) 異なる数のる繰り返し構造を持つrecombinant RGD-CAPタンパク断片を用いることにより、4個の繰り返し構造のうち特に2個の繰り返し構造が重要であることが判明した。

Research Products
(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Kawashima-Ohya,Y.et al.: "Effects of Parathyroid Hormone (PTH) and PTH-Related Peptide on Expressions of Matrix Metalloproteinases-2,-3 and -9 in Growth Plate Chondrocyte Cultures" Endocrinol. 139. 2120-2127 (1998)
[Publications] Kawamoto,T.: "Expression of membrane-bound transferrin-like protein p97 on the surface of chondroeytes." Eur.J.Biochem. 256. 503-509 (1998)
[Publications] Aoyama,Y.et al.: "CYP51-Like Gene of Mycobacterium tuberculosis Actually Encodes a P450 Similar to Eukaryotic CYP51." J.Biochem.124. 694-696 (1998)
[Publications] Shiba,H.et al.: "Differential Effects of Various Growth Factors and Cytokines on the Syntheses of DNA,Type1 Collagen,Laminin,Fibronectin,Osteonectin/Secreted Protein,Acidic and Rich in Cystein (SPARC) and Alkaline Phosphatase by Human Pulp Cells in Culture" Journal of Cellular Physiology,. 174. 194-205 (1998)
[Publications] Kawashima-Ohya,Y.et al.: "Retinol-Binding Protein is Produced in Rabbit Chondrocytes and Responds to Parathyroid Hormone (PTH)/PTH-Related Peptide-cAMP Pathway." Endocrinol.140(in press). (1998)
[Publications] Makihira,S.et al.: "Enhancement of Cell Adhesion and Spreading by a Cartilage-Characteristic Noncollagenous Protein,Cartilage-matrix Protein (CMP/Matrilin-1),via Integrin α1β1" J.Biol Chem.274(in press). (1998)

1998 Fiscal Year Annual Research Report

軟骨組織におけるRGD構造を持つコラーゲン結合蛋白(RGD-CAP)の発現と機能

Principal Investigator

能城 光秀 広島大学, 歯学部, 助教授 (00144858)

Research Products

[Publications] Kawashima-Ohya,Y.et al.: "Effects of Parathyroid Hormone (PTH) and PTH-Related Peptide on Expressions of Matrix Metalloproteinases-2,-3 and -9 in Growth Plate Chondrocyte Cultures" Endocrinol. 139. 2120-2127 (1998)

[Publications] Kawamoto,T.: "Expression of membrane-bound transferrin-like protein p97 on the surface of chondroeytes." Eur.J.Biochem. 256. 503-509 (1998)

[Publications] Aoyama,Y.et al.: "CYP51-Like Gene of Mycobacterium tuberculosis Actually Encodes a P450 Similar to Eukaryotic CYP51." J.Biochem.124. 694-696 (1998)

[Publications] Kawashima-Ohya,Y.et al.: "Retinol-Binding Protein is Produced in Rabbit Chondrocytes and Responds to Parathyroid Hormone (PTH)/PTH-Related Peptide-cAMP Pathway." Endocrinol.140(in press). (1998)

[Publications] Makihira,S.et al.: "Enhancement of Cell Adhesion and Spreading by a Cartilage-Characteristic Noncollagenous Protein,Cartilage-matrix Protein (CMP/Matrilin-1),via Integrin α1β1" J.Biol Chem.274(in press). (1998)

能城光秀広島大学, 歯学部, 助教授 (00144858)