1997 Fiscal Year Annual Research Report
歯周病原性菌特異的な抗組換え蛋白質抗体による好中球機能の賦活とTh1型免疫の誘導
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09671935
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
斉藤 重野 日本大学, 松戸歯学部, 講師 (60072394)
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| Keywords | 歯周病 / Porphyromonas gingivalis / 抗組換え蛋白質抗体 / 好中球 / 貧食 / オプソニン化 |
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| Research Abstract |
歯周病免疫療法開発の一端として、受動免疫抗体による好中球機能への賦活効果を図った。好中球による細菌貧食はオプソニンの存在下に促進されるが、。オプソニンとして有効なのは菌体表層抗原に対する抗体である。本研究ではPorphyromonas gingivalisの分子量40,000の外膜タンパク質に着目して、その組換えタンパク質(r40-kDa OMP)に対するウサギ抗血清(r40-kDa OMP Ab)を用いて、好中球機能賦活効果をin vitroで研究した。
好中球機能を有する細胞モデルの確立:
ヒト末梢血から好中球を分取するには、多量の新鮮血を要すること、純度高い標品を得るのに数時間かかること、個人により好中球機能に差があり再現性に不安があることなど、多少問題があった。そこで、継代培養可能なヒト由来細胞株HL-60 cell lineをDMSOにて処理し、成熟な好中球機能を有するin vitroモデル系を確立した。
貧食および殺菌率算定法の確立:
^3H-標識した本菌をr40-kDa OMP Abおよび補体と前温置し、好中球モデル系に与え、培養後、細胞を洗浄、破壊し、細胞内に取り込まれた細菌の放射活性を測定する方法で、取り込み率を算出した。同時に、取り込まれた細菌にBHI培地を加え、一夜培養後に吸光度を測定し、増殖曲線から殺菌率を表した。
r40-kDa OMP Abによるオプソニン効果:
r40-kDa OMP Abは自ら殺菌活性を有しない低濃度にて、本菌をオプソニン化し、好中球による本菌貧食能を補体の存在下に増強した。また、培養上清中の放射活性の上昇と細菌増殖率の低下は、好中球が本菌を殺菌・消化後、排泄したことを示唆した。実験結果はr40-kDa OMP Abは受動免疫抗体として生体第一次防御機構を賦活する可能性を提供した。結果を平成9年度歯科基礎医学会に発表し、J.Periodintolにて投稿準備中である。
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