周皮細胞プロテオグリカンの特性,機能および産生調節の解明

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09672260
• Research Institution: Hokuriku University
• Principal Investigator: 鍛冶 利幸 北陸大学, 薬学部, 助教授 (90204388)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮島 三和子 北陸大学, 薬学部, 助手 (30278139) ; 藤原 泰之 北陸大学, 薬学部, 助手 (40247482) ; 山本 千夏 北陸大学, 薬学部, 助手 (70230571)
• Keywords: 周皮細胞 / プロテオグリカン / バーシカン / ビグリカン / デコリン / パールカン / コア蛋白 / 血管

Research Abstract

細胞培養系を用いて,周皮細胞が産生するプロテオグリカンの生化学的特性を調べ以下の結果を得た。ウシ網膜由来周皮細胞をサブコンフルエントまで培養後,[^<35>S]硫酸または[^<35>S]メチオニン/システインで代謝標識し,放射活性なプロテオグリカンを分析した。細胞眉および培地に蓄積した[^<35>S]硫酸標織プロテオグリカンはDEAE-Sephacel陰イオン交換クロマトグラフィーによって3つのピークに分離された。Sepharose CL-6Bクロマトグラフィーによって,最も低荷電のピークの主成分が約45kDaのヘパラン硫酸を結合したヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPGs)であり,他の高荷電の2つのピークの主成分は約45kDaのコンドロイチン/デルマタン硫酸を結合したコンドロイチン/デルマタン硫酸プロテオグリカン(CS/DS PGs)であることが示された。主な産物はHSPGsではなく,CS/DS PGsであった。CS/DS PGSを主成分とする2つのピークをそれぞれSepharoseCL-4Bでゲルろ過した結果,より高荷電なピークは大型の,より低荷電なピークは小型のCS/DS PGsを主として含むことが示された。そこで,DEAE-Sephacelクロマトグラフィーによって得た[^<35>S]メチオニン/システイン標識CS/DS PGs画分をSepharose CL-2Bで分離し,コア蛋白をSDS-PAGEで検討したところ,大型CS/DS PGsのコアは分子量約450および550kDaに,小型CS/DS PGsのコアは約50kDaに認められた。Western blot分析によって周皮細胞が産生するHSPGコアは主としてパールカンコア,大型CS/DSPGコアはパーシカンコア,小型CS/DS PGコアはビグリカンおよびデコリンコアであることが示された。