好塩基球細胞の情報伝達におけるエクトキナーゼの役割の解明

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09672270
• Research Institution: National Institute of Health Sciences
• Principal Investigator: 手島 玲子 国立医薬品食品衛生研究所, 機能生化学部, 研究員 (50132882)
• Keywords: IgE受容体 / 好塩基球細胞 / エクトキナーゼ / 情報伝達 / 脱顆粒反応

Research Abstract

平成10年度のアレルギー担当細胞である好塩基球細胞の情報伝達に関与するエクトキナーゼの同定並びにその役割の解明に関する研究から下記の知見が得られた。(1)エクトキナーゼの解析:培養ラット好塩基球細胞(RBL-2H3)及びマウス骨髄由来肥満細胞(BMMC)上のエクトキナーゼについて、外因性基質を用いて解析を行ったところ、用いた外因性基質の中で、カゼインが最も強くリン酸化され、リン酸供与体として[γ-32P]ATPばかりでなく、[γ-32P]GTPも同程度に機能することが判明した。抗カイゼンキナーゼI抗体を用い、細胞膜画分のウェスタンプロット解析を行ったところ、分子量44KDaのバンドが観察され、カゼインキナーゼIIの存在が確認された。さらに、IgE受容体の免疫沈降物中にもカゼインキナーゼI工の存在が確認され、一部IgE受容体と結合して存在することが示唆された。また、カゼインキナーゼII抗体を用いた間接蛍光抗体法による細胞表面の標識の結果からも、カゼインキナーゼ11の細胞表面上での存在が確認された。このキナーゼ活性は、細胞非透過性のセリン・スレオニンキナーゼ阻害剤K252bで抑制され、カゼインキナーゼ抑制剤ヘパリンでの抑制並びに活性化剤ポリアミンでの活性増強が観察された。(2)初期シグナルの解析:RBL-2H3細胞からのIgE受容体を介する脱顆粒反応へのカセインキナーゼII抑制剤の効果を検討した結果、10個のアミノ酸よりなるカゼインキナーゼIIの外因性基質が最も強い抑制効果を持ち、ついで、randomGTcopolymerも抑制効果を有していた。以上、好塩基球細胞における、カゼインキナーゼ11のエクト型としての存在を初めて明らかとし、IgE受容体を介する情報伝達に何らかの作用を持つことを示すことができた。

Research Products

• [Publications] Reiko Teshima: "casein-kinase-II-like ectokinase activity on RBL-2H3 cells" Immunol.Letter. (in press). (1999)
• [Publications] Mamoru Nakanishi: "Cell signaling and imaging in mast cell activation" Current Trends in immunology. (in press). (1999)