1998 Fiscal Year Annual Research Report
S期特異的に発現する核蛋白質の新しい遺伝子の単離と放射線に対する応答に関する研究
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09680540
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| Research Institution | National Institute of Radiological Sciences |
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Principal Investigator |
武藤 正弘 放射線医学総合研究所, 生物影響研究部, 研究員 (80166230)
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| Keywords | Np95 / PCNA / 細胞周期 / DNA複製 / 修復 / Rb結合モチーフ / モノクローナル抗体 / 染色体 |
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| Research Abstract |
S期特異的に発現する新規核蛋白質NP95のcDNAクローンを分離した。この遺伝子産物は、95kDaの分子量を持ち、放射線発がん高発系B10系マウスでは前がん細胞の発生する時期に高発現することや、リンパ腫では細胞周期によらず異常発現する。また抗Np95(Th-10a mAb)をFITC標識し、抗PCNA(PC10)をTexas Redで標識して、m5s細胞を二重染色して解析したところ、Gl期及びS期において核内でNp95とPCNAの局在が、ドット状に一致して分布していることが示された。またmetaphaseやanaphaseの細胞分裂の各時期においても、染色体のまわりに結合している像が観察された。
平成10年度においては、Np95の遺伝子のターゲッテングベクターを作成し、ES細胞に導入し、ノックアウトマウスの作成することを試みた。その結果、ES細胞にNp95の遺伝子のターゲッテングベクターを組み込むことに成功し、さらにネオマイシンの濃度を上げることによって、もう一方の対立遺伝子のNp95遺伝子も欠損している細胞株ES.Np95-I-を作成することが出来た。現在、ES.Np95+/-細胞を、マウスのBlastocystに入れて、ノックアウトマウスを作成中である。またNp95遺伝子欠損ES.Np95-/-細胞について、放射線に対する反応性を調べたところ、放射線感受性であることが、明らかになった。これらの結果から、Np95は、DNA修復、複製、細胞周期に関与する調節蛋白の可能性が示唆される。今後は、UVやアルキル化剤に対する反応やアポトーシスとの関係を解析し、Np95の機能解析をさらに進める。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Fujimori,A.,: "Cloning and mapping of Np95 gene which encodes a novel nuclear protein associated with cell proliferation." Mammalian Genome. 9. 1032-1035 (1998)
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[Publications] Muto,M.: "The characterization of the monoclonal Antibody Th-10a specific for a nuclear protein appearing in the S Phase of the cell cycle in normal thymocytes and its unregulated expression in lymphoma cell lines." Cell Prolif.28. 645-657 (1995)
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[Publications] Muto,M.: "Analysis of Early Initiating Event(s)in Radiation-Induced Thymic Lymphomagenesis" Jpn.J.Cancer Res.87. 247-257 (1996)
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[Publications] Chen,Y.: "Cytogenetic analysis of thymocytes during early stages after irradiation in mice with different susceptibilities to radiation-induced lymphomagenesis." J.Radiat.Res.37. 267-276 (1996)
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[Publications] Araki,R.: "Nonsense mutation at Tyr-4046 in the DNA-dependent protein kinase catalytic submit of severe combined immune deficiency mice." Proc.Natl.Acad.Sci.USA.94. 2438-2443 (1997)
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[Publications] Kawai,H.: "Isolation and characterization of apoptosis-resistant mutants from a radiosensitive mouse lymphoma cell line." Radiat.Res.149. 41-51 (1998)
