1998 Fiscal Year Annual Research Report
チロシンホスファターゼCD45結合性蛋白質の同定と解析
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09680653
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| Research Institution | Kagoshima University |
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Principal Investigator |
古川 龍彦 鹿児島大学, 医学部, 助手 (40219100)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
谷 綾子 鹿児島大学, 医学部, 助手 (70284867)
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| Keywords | チロシンホスファターゼ / CD45 / T細胞 / CD35 / LAR / インスリンレセプター |
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| Research Abstract |
CD45とLAR(Leucocyte Common Antigen Related Protein)は他のほとんどの膜型チロシンホスファターゼ(PTP)と同じく2つのPTPドメインを持っている。これらの膜型PTPについて、2つのドメインの基質、結合蛋白質に対する結合性から機能を調べた。
CD45とLARのN末側のPTPドメイン(D1)のシステインをセリンに置換した変異体、CD45D1CS,LARD1CSはホスファターゼ活性を持たない。それぞれの変異体をCOS細胞で発現させて、CD45D1CSがリン酸化CD3ζと、LARD1CSがリン酸化インスリンレセプター(IR)とそれぞれ安定に結合することを見いだした。また野生型のLARがIRを選択的に脱リン酸化した。このことからCD3ζがCD45の、IRがLARの生理的基質であると考えられる。CD3ζの7つのチロシン残基のうち5つをフェニルアラニンに置換した3種類の変異体とCD45D1CSを用いて、CD45の基質特異性を検討したがこれらとの結合性に明らかな差はなかった。一方、ShcのSH2ドメインはC末から2番目のチロシンを欠く変異体CD3ζに全く結合性を示さずこのリン酸化チロシン残基に結合すると考えられた。
C末側のPTPドメイン(D2)のシステインもセリンに置換した変異体CD45D1D2CSではCD3ζへの結合性はCD45D1CSに比べて低いこと。同じくLARD1D2CSでは、IRとの結合が弱いことから、CD45とLARともD2は基質に対してリン酸非依存的結合し、その結合にシステイン残基が重要であることが判明した。
また、LARD1CSはIRキナーゼでリン酸化されたが、LARD1D2CSはLARD1CSよりも強くリン酸化されたことから、LARのD2部分に自己脱リン酸化能があることが示唆された。
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[Publications] Tomoyuki Sumizawa: "Reversal of MRP-associated drug resistance by the pyridine analog,PAK-104P." Mol.Pharmacol.51. 399-405 (1997)
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[Publications] Kengo Nishimoto: "Thymidine phosporylase activity required for tumor angiogenesis and growth." Oncology Reports. 4. 55-58 (1997)
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[Publications] Yukihiro Nakamura: "Function of P-glycoprotein expressed in Placeta and mole." Biochem.Biophys.Res.Commun.235. 849-853 (1997)
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[Publications] Zhe-Sheng Chen: "Reversal of heavy metal resistance in multidrug resistant human KB carcinoma cells." Biochem.Biophys.Res.Commun.236. 586-590 (1997)
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[Publications] Zhe-Sheng Chen: "An active efflux system for heavy metal in cisplatin-resisitant human KB carcinoma cells." Exp.Cell Res.240. 312-320 (1998)
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[Publications] Yuji Takebayashi: "The expression of multidrug resistance protein(MRP)in human gastrointestinal tract carcinoma." Cancer. 82. 661-666 (1998)
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[Publications] Yutaka Chuman: "Reversal of MRP-mediated vincristine resistance in KB cells by buthionine sulfoximide in combination with PAK-104P." Can.Lett.129. 69-76 (1998)
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[Publications] Shu-ichi Nagayama: "Increased sensitivity to vincristine of MDR cells by the leukotrieneD4 receptor antagonist,ONO-1078." Can.Lett.130. 175-182 (1998)
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[Publications] Kitazono,M: "Prevention of hypoxia-induced apoptosis by the agiogenic factor thymidine phosphorylase." Biochem.Biophys.Res.Commun.253. 797-803 (1998)
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[Publications] Chen,Z.S.: "An enhanced active efflux of CPT-11 and SN-38 in cisplatin-resistant human KB carcinoma cells." Cancer.Lett.(in press). (1999)
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[Publications] Matsushita,S: "The effect of a thymidine phosphorylase inhibitor on angiogenesis and apotosis in tumors." Cancer Res.(in press). (1999)
