1997 Fiscal Year Annual Research Report
細胞の増殖・分化における3'ーリン酸化イノシトールリン脂質の役割
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09760072
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
永田 諭志 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 講師 (40246682)
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| Keywords | 細胞分化 / 細胞増殖 / ホファチジルイノシトール / モノクロナール抗体 / 細胞内局在 / 細胞内情法伝達 |
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| Research Abstract |
細胞の増殖分化の調節に関わっているホスファチジルイノシトール3キナーゼ(PI3K)の産物であるホスファチジルイノシチド-3,4,5-3リン酸(PIP_3)の役割を検討するため、PIP3に特異的なモノクローナル抗体の作製を試みた。合成PIP3を抗原とし,PIP3に反応しホスファチジルイノシチド-4,5-2リン酸に反応しない抗体をリポソームリシスアッセイおよびELISAにより検討したところ、2クローンのPIP3特異的モノクロナール抗体を得た。このうち反応性の高いクローン(AP3#11)はホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、カルジオリピンなどの各種リン脂質には全く反応せず、イノシトール-1,4,5-3リン酸、イノシトール-1,3,4,5-4リン酸、フィチン酸などのイノシトールポリリン酸に対しても反応しなかった。このことからAP3#11はPIP3に特異的なプローブになることが予測された。AP3#11を用いた競合法ELISAによりPIP3の測定を試みたところ、nMオーダーのPIP3を特異的に検出できることが示された。またこの抗体を用いてPC12、MDCK、MKN-7、3Y1などの種々の培養細胞について免疫染色をおこなったところ、いくつかの例でEGFなどの増殖因子刺激依存的に核近傍のmicrotubules organization center(MOC)の付近にクラスター上の染色像が観察された。この結果は、従来細胞膜や、小胞体の膜上で働くと考えられていたPIP3が、生細胞中ではMOCなどで機能している可能性を示唆した。現在、さらに種々条件下でのPIP3の細胞内局在を明らかにするとともに、AP3#11の細胞内マイクロインジェクションによるPI3K下流因子の阻害について検討している。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] K.Tanaka et al.: "A target of phosphatodylinositol 3,4,5-trisphosphate with a zinc finger motif similar to the ADP-ribosylation-factor GTPase-activating protein and two pleckstrin homology domains." Eur.J.Biochem.245. 512-519 (1997)
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[Publications] I.Nakamura et al.: "phosphatidylinositol-3kinase is involved in ruffled border formaion in osteoclasts." J.Cell.Physiol. 172. 230-239 (1997)
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[Publications] S.Ihara et al.: "Dual controi of neurite outgrowth by STAT3 and MAP kinase in PC12 cells stimulated with interleukin-6." EMBO.J. 16. 5345-5352 (1997)
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[Publications] M.Kobayashi et al.: "Expression of constitutively active phosphatidylinositol-3kinase induces process formation in rat PC12 cells: use of cre-lox P recombination system." J.Biol.Chem.272. 16089-16092 (1997)
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[Publications] S.Daduang et al.: "Density dependent elevation of phosphatidylinositol-3kinase level in rat 3Yl cells." Biochem Biophys.Acta.in press.
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[Publications] Y.Kita et al.: "Microinjection of activated phosphatidylinositol-3kinase induces process outgrowth in rat PC12 cells." J.Cell.Sci.in press.
