1998 Fiscal Year Annual Research Report
トランスジェニックネマトーダを用いた生物検定法の確立
Project/Area Number |
09760308
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Research Institution | Tottori University |
Principal Investigator |
河野 強 鳥取大学, 農学部, 助教授 (50270567)
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Keywords | グルタミン酸 / トランスポーター / 線虫 / トランスジェニック / 生物検定法 / クローニング / サブタイプ |
Research Abstract |
線虫のゲノムプロジェクト情報を詳細に検索したところ、グルタミン酸トランスポーター遺伝子には、報告者が既にクローニングしたもの(Ceglut-I)以外に3つのサブタイプが存在することが示唆された。そこで、これらの遺伝子について、RACE法を用いてcDNAレベルでの塩基配列の確認を行った。3つのサブタイプ(それぞれCeglut-II、-III、-IVと命名)はそれぞれ502、532、575アミノ酸残基よりなり、Ceglut-Iとは43.8%、55.8%、50.8%の相同性を示した。また、ゲノム遺伝子の構造を比較したところ、Ceglut-Iが9個のエキソンからなるのに対し、Ceglut-II、-III、-IVはそれぞれ11、7、8個のエキソンからなり、イントロンの長さもまちまちであった。 さらに、アフリカツメガエル卵母細胞を用いた発現系では、Ceglut-IIおよび-IVはCeglut-Iとほぼ同等のグルタミン酸トランスポート活性を示したが、Ceglut-IIIはグルタミン酸トランスポート活性を殆ど示さなかった。このことから、Ceglu-IIIはグルタミン酸トランスポータースーパーファミリーに属する中性アミノ酸のトランスポーターである可能性が示された。そこで、Ceglut-I-II、-IVに対応する2本鎖RNAを合成し線虫に導入すること(RNAi)により転写阻害を試みたところ、際立った表現型は認められなかった。これは、神経系特異的に発現する遺伝子を標的にした場合、RNAiによる転写阻害が不完全であることによると考えられる。現在、変異剤およびUV照射を併用した遺伝子破壊株の作製を試みている。
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[Publications] 河野 強、他: "Penidienone,a plant growth regulator produced by the fungus,Penicillium sp.no 3." Phytochem.47. 323-325 (1998)
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[Publications] 河野 強、他: "Pesthetoxin,a new phytotoxin produced by the gray blight fungus,Pestalotiopsis theae." Biosci.Biotechnol.Biochem.62. 1624-1626 (1998)
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[Publications] 河野 強、他: "Brevicompanines A and B : new plant growth regulators produced by the fungus,Penicillium brevicompactum." J.Chem.Soc.,Perkin Trans.1. 17. 2823-2826 (1998)
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[Publications] 河野 強、木村靖夫: "無脊椎動物のグルタミン酸トランスポーターの役割" 化学と生物. 36. 626-627 (1998)
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[Publications] 河野 強、他: "Comparison of precursor structures of the GGNG peptides derived from the earthworm Eisenia foetida and the leech Hirudo nipponia" Biosci.Biotechnol.Biochem.63. 443-445 (1999)
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[Publications] 河野 強、他: "Structures of insulin-like peptides of the nematode Caenorhabditis elegans." Pept.Sci.1998. (1999)