モルヒネ禁断後のプレプロエンケファリンmRNA増加の分子メカニズム

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09770065
• Research Institution: Wakayama Medical University
• Principal Investigator: 藤田 優子 (福永 優子) 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 (80254522)
• Keywords: モルヒネ禁断 / プレプロエンケファリンmRNA / 中脳水道周囲灰白質 / リン酸化CREB / c-Fcs / アンチセンスオリゴヌクレオチド / ウエスタンブロッティング法 / in situ hybridization 法

Research Abstract

モルヒネ禁断時のラット尾側中脳水道周囲灰白質(cPAG)のプレプロエンケファリン(PPE)mRNAの増加におけるC-FosおよびcAMP系の関与を検討した。昨年度は、Aキナーゼ阻害剤およびc-fosのアンチセンスオリゴヌクレオチド(AO)の側脳室内前処置がこの増加を抑制することを明らかにしたが、cAMP response element binding protein(CREB)のAO1回前処置は影響を及ぼさなかった。そこで、本年度はモルヒネ禁断時のPAGにおけるc-Fosおよびリン酸化CREB(pCREB)量の変化、ならびにPPE mRNA増加に及ぼすCREBのAO2回前処置の影響を検討した。
1 方法
SD系雄性ラットにモルヒネ20-30mg/kgを5日間連投した。ナロキソン(NLX)によりモルヒネ禁断を誘発し、NLX投与1、2および4時間後のPAGのc-FosおよびpCREB量をウエスタンブロッティング法により定量した。一方、NLX投与8および12時間前にCREBのAO 5nmolを側脳室内投与し、NLX投与4時間後のcPAGのPPE mRNA量を定量的in situ hybridization法に従って測定した。
2 結果
モルヒネ禁断時のPAGにおけるC-Fos量は、NLX投与1時間後から4時間後まで変化せず、pCREB量は、MLX投与1時間後にのみ増加する傾向を示した。
CREBのAO2回前処置は、モルヒネ禁断後のcPAGにおけるPPE mRNAの増加を有意に抑制した。
3 結語
モルヒネ禁断時のcPAGのPPE mRNAの増加に、c-Fosに加えてCREBの関与が示唆された。しかし、モルヒネ禁断時のPAGにおけるc-FosおよびpCREB量の有意な増加は認められず、その原因として、cPAGに限局した測定ではなかったことが考えられ、現在、cPAG局所のこれら蛋白の変化を免疫組織学的に検討している。

Research Products

• [Publications] Fukunaga,Y: "Timecourse of morphine withdrawal and preproenkephalin gene expression in the periaqueductal gray of rats." Mol.Brain Res.55. 221-231 (1998)
• [Publications] Fukunaga,Y: "Effects of peptidase inhibitors [D-Ala^2,Met^5]-enkephalinamide and antiserum to methionine-enkephalin microinjected into the caudal periaqueductal gray on morphine withdrawal in rats." Jpn.J.Pharmacol.78. 455-461 (1998)