ドミナントネガティブets-1による血管新生の制御

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09770091
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 安部 まゆみ 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (80271980)
• Keywords: 血管新生 / ets-1 / ドミナントネガティブ / 血管内皮細胞 / MMP

Research Abstract

転写活性部位を欠失したDNA結合部位のみのtrancated ets-1をPCR法で作成し、シークエンシングして配列を確認後、pCNX2に導入して、マウス血管内皮細胞、MSS31にトランスフェクションした。このtrancated ets-1は、ゲルシフトアッセイにおいて、DNA結合能が高く、intact ets-1のDNA結合を競合阻害した。また、MMP-1のプロモーターを用いたCAT assayにおいて、ets-1の転写活性を阻害したことから、ドミナントネガティブに作用することが確認された。さらに、タイプ1コラーゲンゲルでの管腔形成もpCNX2のみ導入した細胞に比し、著明に抑制された。今後、このtrancated ets-1をアデノウイルスに導入し、in vivoの研究を行っていく予定である。
MTプロモーターを有するベクター、pNMT1を用いたtrancated ets-1のin vitro実験の予備実験として、ets-1 cDNAを導入して、MSS31にトランスフェクションした。亜鉛による発現促進の時間経過を追ったが、亜鉛未添加の状態でのets-1の発現が、MSS31の親細胞株に比し高く、ゲルシフトアッセイやウエスターンブロットの結果より、蛋白レベルでは亜鉛の添加による有意の増加がみられなかった。今後、テトラサイクリンにより発現調節が可能なベクターを用いた研究を検討している。