病態局所における好中球の代謝動態とシグナル伝達

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09770104
• Research Institution: Osaka City University
• Principal Investigator: 佐藤 英介 大阪市立大学, 医学部・生化学第一教室, 助手 (60211942)
• Keywords: 好中球 / 活性酸素 / チロシンリン酸化酸素 / HL-60 / プライミング / アンチセンス

Research Abstract

循環血液中の好中球の活性酸素産生能は低いが、起炎物質などでプライミングされると数十倍に活性化される。これまでに、腫瘍壊死因子(TNF-α)や顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)等によるプラミングにはチロシンキナーゼの活性化と115kDa蛋白チロシン残基のリン酸化が関与していることを報告してきた。今年度はHL-60細胞を用い、プライミングにおけるチロシンキナーゼの関与をさらに解析した。
HL-60細胞を10%FCS添加RPMI640培養液で培養し、レチノイン酸あるいはdbcAMPによって好中球様細胞に分化させた。活性酸素産生能は新規高感度化学発光剤L-012により測定した。チロシンキナーゼ活性はモノクローナル抗リン酸化チロシン抗体PY-20を用いたウエスタンブロッテングにより解析した。
(1)HL-60細胞の活性酸素産生能はレチノイン酸あるいはdbcAMPによる分化誘導により増強するが、FMLP刺激に対する応答はdbcAMPの方が著明であった。(2)いずれの誘導剤でもTNF-α依存性プライミングが見られるが、dbcAMPの方がより顕著であった。(3)いずれの誘導においてもプライミングより115kDa蛋白のチロシン残基のリン酸化が検出されたが、(4)TNF-αによるプライミング時のチロシンリン酸化はレチノイン酸方が顕著であった。(5)ウエスタンブロットおよび免疫沈降による解析の結果、115kDa蛋白はc-Cblであることが判明した。現在、115kDa蛋白質のアンチセンスを用いて本分子とプライミングとの分子関連を解析中である。

Research Products

• [Publications] Nishikawa,M.;Sato,E.F.;Kuroki,T.;Inoue,M.: "Role of glutathione and nitric oxide in the energy metabolism of rat liver mitochondria" FEBS Lett.415(3). 341-5 (1997)
• [Publications] Yamamasu,S.:Sato,E.F.;Ogita,S.;Inoue,M.: "Role of glutathione metabolism and apoptosis in the regression of liver hemopoiesis" Free-Radic-Biol-Med. 23(1). 100-9 (1997)
• [Publications] Yu,H.;Sato,E.F.;Nagata,K.;Nishikawa,M.;Kashiba,M.;Arakawa,: "Oxygen-dependent regulation of the respiration and growth of Escherichia coli by nitric oxide" FEBS Lett.409(2). 161-5 (1997)
• [Publications] Yu,H.;Sato,E.F.;Minamiyama,Y.;Arakawa,T.;Kobayashi,K.;Inoue,M.: "Effect of nitric oxide on stress-induced gastric mucosal injury in the rat" Digestion. 58(4). 311-8 (1997)
• [Publications] Shiraishi,I.;Sato,E.F.;Nishikawa,M.;Sendo,F.;Inoue,M.: "Mechanism of hypotensive shock induced by anti-neutrophil monoclonal antibody" Pathophysiology. 4:. 197-204 (1997)
• [Publications] Morishita,S.;Nishi,Y.;Sato,E.F.;Manabe,M.;Yamaoka,K.;Inoue,M.: "Cold-induced apoptosis in rat thumocytes in vivo" Pathophysiology. 4. 213-219 (1997)
• [Publications] Nishikawa,M.;Sato,E.F.;Kashiba,M.;Kuroki,T.;Utsumi,K.;Inoue,M.: ":Role of glutathione and nitric oxide-dependent regulation of energy metabolism in rat hepatoma cells" Hepatology. 27. 422-426 (1998)
• [Publications] Nakanishi,K.;Nishi,Y.;Sato,E.F.;Ishii,M.;Hamada,T.;Inoue,M.: "Termal injury induces thymocyte apoptosis in the rat" J.Trauma. 44(1). 143-148 (1998)
• [Publications] Nakahara,H.;Sato,E.F.;Ishihara,R.;Yabuki,M.;Inoue,M.;Utsumi,K.: "Biochemical Properties of human oral neutrophils" Free Radic.Res.(in press). (1998)
• [Publications] Nishikawa,M.;Takeda,K,;Sato,E.F.;Kuroki,T.;Inoue,M.: "Nitric oxide regulates energy metabolism and bcl-2 expression in rat intestional epithelial cells" Am.J.Physiol.(in press). (1998)
• [Publications] Morishita,S.;Nishi,Y.;Sato,E.F;Manabe,M.;Yamaoka,K.;Inoue,M.: "Hypoglycemia-induced apoptosis in rat thymocytes in vivo" Dyabetes Res.Clin.Prac.(in press). (1998)
• [Publications] Nagata,K.;Yu,H.;Kashiba,M.;Nishikawa,M.;Sato,E.F.;Utsumi,K.: "Irreversible inhibition of respiration of Helicobacter pylori by nitric oxide" J.Biol.Chem.(in press). (1998)
• [Publications] Yamamoto,H.;Sasaki,J.;Matsuure,J.;Momura T.;Sato,E.F.;Shimokawa,H.: "Characterization of the inner enamel epithelium in the enamel-free area based on the ability to secrete enamel protein demonstrated by in situ hybridization" Acta Anatomica. (in press). (1998)
• [Publications] Minamiyama,Y.,Sato,Ef.,Takemura,S,,Inoue.M..: "Food and Free Radicals" Hiramatsu, M.Plenum press,New York, 137-140 (1997)
• [Publications] Kashiba-Iwatsuki,M.,Kitoh,K.,Nishikawa,M..Sato,E.F.,Inoue.: "Oxygen Homeostasis and its dynamics" Ishimura,Y.,Shimada,H.,Springer-Verlag,Tokyo, 562-568 (1998)
• [Publications] Utsumi,K.,Takehara,Y.,Inai,Y.,Yabuki,M.,Kanno.T..Nishikawa.: "Mitochondria,Oxidants,and Aging" Packer,L.,Cadenas Academic Press, (in press) (1998)