1997 Fiscal Year Annual Research Report
単純ヘルペスウイルス誘導プロテインキナーゼの特性と役割について
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09770203
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
大黒 徹 名古屋大学, 医学部, 助手 (80291409)
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| Keywords | 単純ヘルペスウイルス / プロテインキナーゼ |
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| Research Abstract |
単純ヘルペスウイルス(HSV)のコードするUL13プロテインキナーゼ(PK)はカゼインのような酸性蛋白質を良くリン酸化し、細胞質よりも核に多く局在することがわかった。また、HSV-2の方がHSV-1に比べ10倍程度PK活性の誘導が高いため、HSV-2感染Vero細胞の核画分からUL13PKを精製した。精製したUL13PKについて至適反応条件、阻害物質、基質特異性について検討した。HSV-1 UL13を制限酵素サイトをもつprimerを用いてPCRを行い、pET-28発現ベクターでUL13の発現系を作製した。大腸菌で発現させたUL13産物を精製し、ウサギに免疫して抗体を作製した。この抗体を用いて精製UL13プロテインキナーゼをWestern blottingで確認した。またHSV-2 UL13の全塩基配列を決定した。
精製HSV-2 UL13PKは銀染色で57Kの単一バンドで、Western blottingでも反応性を確認した。このPKはHSV-1 UL13 PKと異なり塩濃度に感受性で、ヘパリンに対する感受性は宿主のカゼインキナーゼI、IIに比べてより抵抗性であった。基質特異性、並びにカゼインキナーゼに対する阻害物質の結果から、HSV-2 UL13PKはカゼインキナーゼIIよりもむしろカゼインキナーゼIに類似した性状を示したが、宿主のカゼインキナーゼとは異なる独白のプロテインキナーゼであることがわかった。
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[Publications] Tohru Daikoku: "Purification and characterization of the protein kinase encoded by the UL13 gene of herpes simplex virus type 2" Virology. 235. 82-93 (1997)
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[Publications] Tatsuya Tsurumi: "Strand displacement associated DNA synthesis catalzed by the Epstein-Barr virus DNA polymerase" Biochemical and Biophysical Research Communication. 238. 33-38 (1997)
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[Publications] Hiroshi Yamada: "The product of the US10 gene of herpes simplex virus type 1 is a capsid/tegument-associated phosphoprotein which copurifies with the nuclear mat_1" Journal of General Virology. 78. 2923-2931 (1997)
