1998 Fiscal Year Annual Research Report
細胞融合制御因子(FRP-1)リガンドの同定及びFRP介在の細胞融合機構の解明
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09770204
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
河野 光雄 三重大学, 医学部, 講師 (00234097)
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| Keywords | Fusion Regulatory Protein / FRP / 細胞融合 / 巨細胞 / CD98 / 4F2 / リガンド |
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| Research Abstract |
本研究では、細胞接着因子としての機能を有し、細胞融合制御システムの一部として存在するFusion Regulatory Protein(FRP-1)に対するリガンドの同定を目的に研究を行った。
昨年度の研究でリガンド検索のプローブトして作製したsoluble FRP-1(sFRP)の大量精製のためセンダイウイルスベクター(東大医科研、永井教授より分与)を用いて、発育鶏卵の漿尿液からのsFRP-1の回収及び精製を、それと並行してLac switchを用いたsFRP-1誘導発現細胞の培養上清からの精製をアフィニティーカラムを用いて行った。このプローブを用いてリガンドのdistributionを検索した結果、HsOs-1及びGCT細胞に多く発現しており、これらの細胞からcDNAライブラリーを作製した。HsOs-1細胞からのcDNAライブラリーは、mix primer(n=20)を用いたRT-PCR法によりcDNAを作製し、SurfZAPベクターを用いたPhage display(バイオパンニング)によるスクリーニングに、また、GCT細胞からのcDNAはoligo dTおよびrandom primerを用いたGubuler-Hoffman法により作製し、発現ベクター(SRα296)に挿入し、COS細胞を用いたパンニングに使用した。
現在までのところ、これらのスクリーニング結果からのリガンドの同定にはいたっていない。さらにスクリーニングを繰り返し、また、新たにFACScansortingによるスクリーニングを導入してリガンドの同定を遂行したい。
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[Publications] Hideki Tsumura: "Mouse alloantigen Ly10 is identical to murine fusion regulatory protein-1 (mFRP-1)/4F2/CD98: aberrant expression of mFRP-1 /Ly10 allotypes in cells derived from CDF1 mice due to the gene deletion." Cellular Immunology. 184(2). 153-160 (1998)
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[Publications] Masato Tsurudome: "Identification of regions on the fusion protein of human parainfluenza virus type 2 which are required for haemagglutinin-neuraminidase proteins to promote cell fusion." Journal of General Virology. 79. 279-289 (1998)
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[Publications] Masato Tsurudome: "Primary structure of the light chain of fusion regulatory protein-1/CD98/4F2 predicts a protein with multiple transmembrane domains that is almost identical to the amino acid transporter E16." Journal of Immunology. (in press). (1999)
