EB(エプスタイン・バール)ウイルス・ベクターによるヒト造血幹細胞への遺伝子導入

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09770208
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 松田 修 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (00271164)
• Keywords: 遺伝子治療 / 造血幹細胞 / アデノシン・デアミナーゼ / EBウイルス

Research Abstract

EBVエピゾーマル・ベクターは,種々の細胞に非常に効率良く遺伝子導入/発現が可能であり、なおかつ安全性の面でも優れている。そこでこの系を遺伝子治療に応用する試みの一環として、本研究ではヒト造血幹細胞を標的細胞とし,これに外来遺伝子を導入/発現させるシステムの樹立を試みた。悪性リンパ腫等の悪性腫瘍の患者の末梢血から得たCD34陽性細胞に,アデノシン・デアミナーゼ(ADA)遺伝子発現ユニットを有するEBVエピゾーマル・ベクターをex vivoで導入した。導入後の細胞をIL-3,IL-6,SCF存在下で培養したのち解析すると,RT-PCRにより導入遺伝子特異的なmRNAの発現を,また酵素活性の測定により1,5-2.0倍のADA活性の上昇を認めた。また,導入後の細胞を造血因子を含むメチルセルロース軟寒天培地中で培養することによりCFU-cコロニーを作製し,個々のコロニーごとにRT-PCR解析をおこなったところ,37%以上のコロニー形成細胞に導入できていたことがわかった(Satoh et al.,FEBS Lett.1998)。他方、より導入効率を高めるための手段として,現在報告されているさまざまなポリマー、あるいは合成担体を、EBVベクターとカプリングさせることを試みた。カチオニック・リポソーム,あるいはHVJ-リポソームと組み合わせた系により、ヒト骨髄細胞にマーカー遺伝子を導入/発現させ得ることを,すでに昨年度に発表したが、本年度はさらにポリカチオンを担体として用いることにより、種々のヒト由来腫瘍細胞株にin vitro、およびin vivoで安全かつ効率的に遺伝子を導入できることを見い出した(Hadara et al.,Cancer Gene Therapy誌,in press;Tabata et al.,投稿中)。現在この系のCD34陽性細胞への応用を試みている。

Research Products

• [Publications] Y.Harada, (8名略) & O.Mazda: "Highly Efficient Suicide Gene Expression in Hepatocellular Carcinoma Cells by EBV-Based Plasmid vectors Combined with Polyamidoamine Dendrimer" Cancer Gene Ther.(in press).
• [Publications] K.-1.Tomiyasu, (5名略) & O.Mazda.: "Gene Transfer in vitro and in vivo with Epstein-Barr Virus-Based Episomal Vector Results in Markedly High Transient Expression in Rodent Cells" Biochem.Biophys.Res.Commun.253.3. 733-738 (1998)
• [Publications] E.Satoh, (5名略) & O.Mazda: "Successful Transfer of ADA Gene in vitro into Human Peripheral Blood CD34_+ Cells by Transfecting Epstein-Barr Virus(EBV)-Based Episomal Vectors" FEBS Lett.441.1. 39-42 (1998)
• [Publications] Mazda, O.: "Viral Vectors: Basic Science and Gene Therapy" Eaton Publishing, Natick, MA, ((in press))