肺小細胞癌におけるproGRP遺伝子の発現調節と遺伝子治療への応用に関する研究

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09770427
• Research Institution: Jikei University School of Medicine
• Principal Investigator: 内田 和宏 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (70277002)
• Keywords: 肺小細胞癌 / 腫瘍マーカー / 遺伝子発現 / proGRP遺伝子 / alternative splicing / GRP受容体遺伝子 / 遺伝子治療

Research Abstract

Progastrin-releasing peptide(ProGRP)はGRPの前駆体で,肺小細胞癌(SCLC)に特異的な腫瘍マーカーである.近年,GRPのSCLCにおけるautocrine growth factorとしての作用が注目されており,抗GRP抗体がSCLCの増殖をin vitroおよびin vivoで抑制することが明らかにされ,米国では抗GRP抗体のSCLC患者に対する臨床冶験が進められている.しかしながら,臨床的にSCLC患者においてGRPがどの程度autocrine growth factorとして作用するか明らかではない.さらに,SCLC腫瘍内のproGRP遺伝子発現の有無と,血清中のproGRP値の関連も不明である.
1997年度の今研究では(1)SCLC患者の血清proGRP値と腫瘍内のproGRP mRNA発現と相関,(2)proGRP遺伝子発現のSCLC腫瘍組織内におけるproGRP mRNAのalternative splicingの状況,(3)SCLC腫瘍組織中のproGRP遺伝子およびGRP受容体(GRPR)遺伝子の発現の相関について検討を行った.まず,(1)SCLC5例の腫瘍組織から患者より同意を得たうえでmRNAを抽出後,逆転写反応(RT)によりcDNAに変換し,proGRP遺伝子に特異的なプライマーを用いてnested PCR増幅により解析した.その結果血清proGRP値が高値を示した3例においてproGRP mRNAの発現が認められたが,血清proGRPの上昇をみない2例のSCLC患者の腫瘍内ではproGRP mRNAは検出されなかった.(2)次いでproGRP遺伝子からalternative splicingによりtype,I,II,IIIの3種の成熟mRNAが生成されうるため,これら3群のmRNAの発現状況を比較検討した.その結果,腫瘍組織内でproGRP mRNAが発現している3例において症例間では明らかな差異はなく,mRNA分画の平均はtypeIが58%,typeIIは検出されず,typeIIIは42%であった.(3)GRPR遺伝子についても(1)と同様,5例のSCLC患者組織内のmRNAをRT-nested PCRにて検討の結果,proGRP mRNA発現が認められた2例で陽性であった.以上よりGRPのSCLCに対するautocrine growth factorとして作用と,さらにGRPのSCLC細胞におけるGRPR遺伝子発現に対する調節作用の可能性が示唆された.今後,肺扁平上皮癌および腺癌細胞,あるいは脳,膵臓,肺組織などにおけるproGRPおよびGRPR遺伝子の発現とその調節機構に関しても同様に検討し,さらにproGRP遺伝子promoterを用いた,SCLCに特異的な遺伝子治療法についても研究を進める予定である.