1997 Fiscal Year Annual Research Report
ジストロフィン遺伝子の発現調節機構の異常とその病態の解析
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09770554
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
木村 重美 熊本大学, 医学部付属病院, 助手 (60284767)
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| Keywords | dystrophin / プロモーター / エンハンサー / lacZ / トランスジェニックマウス / 発現 / MEF-2 / M-CAT |
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| Research Abstract |
1.DNAモチーフ解析
筋型エクソン1の上流7008bpの領域には心筋・骨格筋・平滑筋に関連するcis-acting elementsとしてE-boxが32カ所、MEF-2とTREが2カ所ずつ、M-CATとCArG boxがそれぞれ1カ所ずつ見つかった。そのほかsilencer binding siteが2カ所見つかった。
2.dystrophin promoter-lacZの培養細胞への導入・発現解析
11種類のコンストラクトを作製し、リボフェクションによってC2/4 myoblastに導入し、myotubeでの発現を調べたところ7kbのイントロン1内にエンハンサー活性が認められた。
3.トランスジェニックマウスの発現解析
7kbのプロモーター領域にlacZ遺伝子をつなぎ、さらにエンハンサーとして7kbのイントロン1をつけたtransgeneを使ってトランスジェニックマウスを作製してX-gal染色によってlacZ遺伝子の発現を調べたところ、embryoでは骨格筋・心筋共に強い発現が見られたが、adultでは骨格筋の発現が著明に減弱していた。また血管平滑筋にもembryoからadultになるまで発現が見られた。
本実験においてadultマウスの骨格筋に1acZの発現が非常に弱かった理由としては2つ考えられる。lつめは使われたtransgeneの中には骨格筋での発現に関与するエンハンサーが完全な形では含まれていないということ、2つめはこれまでに発見されていないadult骨格筋型エクソン1およぴプロモーターが別の部位に存在する可能性があるということである。
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[Publications] 木村重美: "A 900 bp gennomic region from mouse dystrophin promoter directs lacZ reporter expression only to the right heart of transgenic mice." Dvelopment Growth & Differentiation. 39(3). 257-265 (1997)
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[Publications] 木村重美: "2.1 kb5'-flauking region of the brain type dystrophin gene directs the expression of lacz in the cerebreil cortex, but in the hippocampus" Journal of the Neurdogical Sciences. 147(1). 257-265 (1997)
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[Publications] 木村重美: "Muscle type promoter and its first intoron abnormalities in dystrophin gene in patients with Purchenne muscular dystrophy." Journal of Child Neurology. (in press).
