神経芽細胞腫の1p36.1領域における癌関連遺伝子の同定及び遺伝子機能の解析

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09770564
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 山内 忠彦 自治医科大学, 医学部, 助手 (20271223)
• Keywords: 神経芽細胞腫 / 1p36.1 / 癌関連遺伝子

Research Abstract

【今年度の研究報告】
1.1p36.1領域のYAC contig作製
(1)我々の研究室で同定された1p36.1に座位する新たな遺伝子をマーカーとしてYAC libraryをスクリーニングした。
(2)cloningされたYACの一部の塩基配列を決定し、その配列を用いて再度libraryをスクリーニングし、YAC contigを作製した。
(3)cloningされたYAC cloneを制限酵素で処理し、subcloningした。
2.神経芽細胞腫(NB)で共通に欠失しているcloneの検出
(1)NBのcell lineに対してFISH法及びサザン解析により、共通に欠失しているcloneの検出を試みた。
平成9年度中の経過としては、まだ、NBでの共通欠失cloneを特定できてはいないが、その領域を狭められつつあり、現在も継続中である。
【平成10年度の研究展開に関する計画】
NBについては1p36領域において少なくとも3ヵ所の癌抑制遺伝子が存在するといわれ、現在我々が研究を続けている領域もその候補の1つである。
今後も上記の共通欠失cloneの検出を継続し、cloningされ次第以下の計画を進める予定である。
1.cDNA clornng
(1)genomic cloneをもとにcDNA libraryをスクリーニングし、その領域のcDNAをcloningして塩基配列を決定。
(2)homology検索にてその遺伝子の機能を推定する。
2.NB細胞及び組織での異常の確認
(1)NB細胞及び組織にてノザン解析を行い発現の異常を確認する。
(2)NB細胞及び組織に遺伝子導入することにより増殖の抑制を確認する。また、同時にN-myc増幅の有無もみる。
3.遺伝子機能の解析
(1)培養cos細胞に遺伝子導入し、細胞増殖・分化に関連した遺伝子発現の変化を解析する。