1997 Fiscal Year Annual Research Report
体外より容易にその発症が制御可能な先天性表皮角化異常型水疱症のモデル動物の作製
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09770630
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
高橋 建造 京都大学, 大学院・医学研究科, 助手 (80291425)
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| Keywords | ケラチン / トランスジェニック・マウス / 創傷治癒 / 先天性表皮水疱症 / 角化異常症 / 遺伝子治療 |
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| Research Abstract |
1、ヒトケラチン6A遺伝子のプロモーター領域(5kbp,2.5kbp,1.0kbp,0.5kbp)を単離し、これらをレポーターであるガラクトシダーゼ遺伝子に連結し、この融合遺伝子をもつトランスジェニックマウスを作成した。
1)サザンブロット法によるトランスジェニックマウスの選定
2)HE染色による皮膚を含めた全身の臓器の病理組織学的検索
3)ガラクトシダーゼ染色による全身臓器での導入遺伝子の発現の解析
4)正常皮膚および外傷等の病的皮膚でのガラクトシダーゼ染色による遺伝子発現の検討
5)ノザンプロット法による、TPA、レチノイン酸などによる導入遺伝子の誘導の度合いの検討
これらの導入遺伝子の発現組織の解析により、5-1kbpの大きさのプロモーターが、皮膚に誘導可能なプロモーター活性を示すことが明らかとなった。
2、5kbpと2.5kbpのプロモーターを利用し、変異ケラチン遺伝子をマウスの皮膚に誘導発現させた。この融合遺伝子を持つトランスジェニックマウスは、無刺激の状態では、正常な皮膚であるが、ひとたび、刺激をうけると表皮細胞に異常な変異ケラチンを発現、蓄積し、ヒトの遺伝病に見られるような病理像を示すと考えた。この解析のため1の実験に加え、次の実験を行った。
1)抗変異ケラチン抗体による蛍光抗体法を用いた、正常皮膚、外傷後等の病的皮膚での免疫組織学的検討
2)TPA,レチノイン酸、DMBAなどを皮膚に塗布した後の変異ケラチン遺伝子の誘導の度合いの検討
3、上の結果をふまえ、TPA,レチノイン酸などの薬剤を用い、刺激後の経時的な皮膚の病理変化を検討している。さらにテープストリッピングを加えた後の、水疱形成の過程を観察する。
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[Publications] Kenzo Takahashi: "Atrausgenic mouse model with an inducible skin blistering disense phenotype" Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93. 14776-14781 (1996)
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[Publications] Kenzo Takahashi: "Defining a Region of the Human Keratin 6a Gene That Confers Inducible Expression in Stratified Epithelia of Transger Mice." Journal of Biological Chemistry. 272,18. 11979-11985 (1997)
