1997 Fiscal Year Annual Research Report
トロホブラストの分化にともなうヒト絨毛性ゴナドトロピン遺伝子の転写制御機構
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09771276
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
山本 敏也 大阪大学, 医学部, 助手 (80283787)
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| Keywords | トロホブラスト / 分化 / ヒト絨毛性ゴナドトロピン / 転写 / 上皮成長因子 |
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| Research Abstract |
トロホブラストの分化に伴うhCG-α遺伝子の転写活生化に必要なhCG-αプロモーター上のcis-element及びtrans-elementの同定のために、まず種々の長さのhCG-αプロモーターにCATリポーター遺伝子をつないだdeletion mutantを作製した。それらをRcho-1細胞に安定導入し、得られた細胞に上皮成長因子(EGF)を作用させCAT活性を測定した。EGFを6日間作用させたところ2.7倍のhCG-α遺伝子転写活性の上昇が認められたが、deletion mutantを用いた検討によりCRE(cAMP response element)が、hCG-αプロモーター上のEGF応答領域であることを明らかとした。さらに、CREにmutationを入れたhCG-αプロモーター・CATリポーター遺伝子を用い、EGFによるhCG-α遺伝子の活性化におけるCREの重要性を確認した。次に、EGF応答領域に結合する転写因子の解析をゲルシフト法、ウエスタン法、サウスウエスタン法にて行ったところ、CREB(CRE-binding protein)がEGFによるhCG-αプロモーター活性化に関与していることが判明した。さらにその活性化には、Protein kinase C pathwayを用いたCREBのリン酸化機構が重要であることも明らかとした。以上より、トロホブラストの分化に伴うEGFによるhCG-α遺伝子の活性化機構の詳細が明らかとなった。
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