1997 Fiscal Year Annual Research Report
家兎眼毛様体無色素上皮細胞によるwater channel proteinの研究
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09771478
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
鈴木 康之 日本医科大学, 医学部, 講師 (80196881)
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| Keywords | 家兎 / water channel protein / 毛様体 / PCR / 分子生物学 / CHIP / MIWC |
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| Research Abstract |
1.白色家兎肝臓よりgenomic DNAをフェノール-クロロホルムにより抽出してtemplateとした。channel-forming integral protein(CHIP)およびmercury-insensitive water channel(MIWC)の2種のwater channel proteinそれぞれについて、すでに報告されているヒトおよびratの共通アミノ酸配列、cDNA配列よりdegenerate primerを作成し、これを用いてPolymerase chain reaction(PCR)を行うことにより、白色家兎におけるCHIPおよびMIWCに相当する遺伝子配列の一部を増幅した。PCR productをアガロースゲル電気泳動およびcycle sequenceによりその塩基配列を決定したところ、白色家兎genomic DNA中にヒトおよびratのCHIP、MIWCに相同性が高く、白色家兎におけるCHIPおよびMIWCの遺伝子配列の一部であると結論した。
2.白色家兎眼球組織(網膜、虹彩-毛様体、角膜上皮)よりmRNAを抽出し、逆転写酵素でcDNAを作らせ、それに対し上記で決定したCHIPおよびMIWCの塩基配列の一部より作成したprimerでPCRを行い、アガロースゲル電気泳動したところ、それぞれの組織にCHIPおよびMIWCが発現していることを確認した。
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