1997 Fiscal Year Annual Research Report
マルチフォーカス立体ビデオ顕微鏡の開発と細胞内情報伝達機構解明への応用
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09771984
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
小澤 孝一郎 広島大学, 歯学部, 講師 (10211822)
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| Keywords | マルチフォーカス立体顕微鏡 / RBL-2H3細胞 / 3次元解析 / 開口放出 / ヒスタミン / 細胞内カルシウム動態 / 細胞内情報伝達 / 薬効解析 |
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| Research Abstract |
マルチフォーカス立体ビデオ顕微鏡の開発と細胞内情報伝達機構解明への応用を試み、以下の実績を得た。
1.マルチフォーカス立体ビデオ顕微システムの構築
異なる複数の焦点面の明視野像あるいは蛍光像を同時にリアルタイムで観察し、生きた細胞でリアルタイムに3次元的な観察を行うことを目的として、顕微鏡、ビームスプリッター、ハーフミラー、ミクロ型Z型ステージ(自作)、高画質業務用ビデオデッキ、リアルタイム画像解析装置(設備備品費にて購入)を組み合わせて、マルチフォーカス立体ビデオ顕微鏡を開発した(一部、Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 15,1483-1488に報告)。
2.RBL-2H3細胞における開口放出機構の解明
アレルギー反応時に重要な役割を演じるマスト細胞からのヒスタミンの遊離機構を、モデル細胞であるRBL-2H3細胞と本研究において開発したマルチフォーカス立体ビデオ顕微鏡を用い解析した。その結果、fluo-3蛍光を指標として細胞内カルシウムの変化を、2つ以上の焦点面で同時に観察することにより、抗原抗体刺激後の細胞内でのカルシウムイオンの動態は細胞内で一様に変化するのではなく部位により異なっており、しかも各々の領域は細胞内骨格タンパク質を中心とした障壁により隔絶されており、各々で独立して変化すること等を発見した。今回の発見は、これまでの1焦点面のみでの観察では行うことが困難であり、マルチフォーカス立体ビデオ顕微鏡の開発により初めて可能となった(J.Biol.Chem.272,13033-13039;Japan J.Pharmacol.73,68-69;bunseki,720-726)。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Interactions between protein kinase C and pleckstrin homology domains. Inhibition by phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate and phorbol 12-myristate 13-acetate." The Journal of Biological Chemistry. 272・20. 13033-13039 (1997)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Video-microscopy for analysis of molecular dynamics in cells." Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 15. 1483-1488 (1997)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Release of Ca^<2+> from intracellular stores is necessary for Ca^<2+> -influx and exocytosis in RBL-2H3 cells." Japan J.Pharmacol.73. 68-69 (1997)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Analysis of molecular dynamics by video imaging." bunseki. 720-726 (1997)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Simultaneous analysis of membrane potential and calcium mobilization in a pancreatic betacell line MIN6 by use of a double-probe imaging microscope system." Analytica Chemica Acta. (in press). (1998)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Adenovirus-mediated transient overexpression of hexokinase I in insulinoma cells(MIN6)." The Journal of Biological Chemistry. (in press). (1998)
