1998 Fiscal Year Annual Research Report
マルチフォーカス立体ビデオ顕微鏡の開発と細胞内情報伝達機構解明への応用
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09771984
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
小澤 孝一郎 広島大学, 医学部, 講師 (10211822)
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| Keywords | マルチフォーカス立体顕微鏡 / RBL-2H3細胞 / 多次元解析 / 細胞内カルシウム動態 / ヒスタミン / 開口放出 / 細胞内情報伝達機構 / 薬効解析 |
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| Research Abstract |
マルチフォーカス立体カラービデオ顕微鏡の開発と細胞内情報伝達機構解明への応用を試み、以下の実績を得た。
1.マルチフォーカス立体カラービデオ顕微鏡の構築
平成9年度の本研究により、倒立型顕微鏡、ビームスプリッター、ミクロメーター型Z軸ステージ(自作)、モノクロCCDカメラ、リアルタイム画像解析装置(昨年度設備備品費にて購入)を組み合わせたマルチフォーカス立体ビデオ顕微鏡の開発に成功した。本年度はさらに、より高度な解析を可能にすることを目的とし、モノクロCCDカメラでは抽出できなかった色調による情報をカラーCCDカメラにより検出し、細胞内の蛍光物質の動態変化を3次元的に詳細に解析するマルチフォーカス立体力ラービデオ顕微鏡の構築を試み、開発に成功した(Analytica Chimica Acta 365,3-7;115-120)。
2.RBL-2H3細胞におけるヒスタミン含有顆粒の動態細胞内カルシウム変化の3次元解析
上記1.で構築したマルチフォーカス立体カラービデオは顕微鏡を用い、アレルギー反応時に重要な役割を果たしているマスト細胞(RBL-2H3細胞)でのヒスタミン含有顆粒の動態と細胞内カルシウム変化の3次元解析を試みた。その結果、fluo-3蛍光を指標として細胞内カルシウムの変化を、2つ以上の焦点面で同時に観察することにより、(1)紹胞膜の直下数百nmの部分に従来の染色法ではfluo-3により標識されないカルシウム・ストアーが存在すること、(2)この新しく見つけたストアーは小胞体であること、(3)この細胞膜直下の小胞体と細胞膜との間でのカルシウム濃度の上昇が、抗原抗体刺激時の開口放出に必須であること等を発見した。今回の発見は、これまでの1焦点面のみでの観察では行うことが困難であり、マルチフォーカス立体カラービデオ顕微鏡の開発により初めて可能となった(JapanJ.Pharmacol.in press 他)。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Simultaneous analysis of membrane potential and calcium mobilization in a pancreatic beta-cell line MIN6 by use of a double-probe imaging microscope-system." Analytica Chimica Acta. 365. 3-7 (1998)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Direct observation of sample trapping process onto internal-surface reversed-phase pre-column." Analytica Chimica Acta. 365. 115-120 (1998)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Trapping of secreted molecules at single-cell level using an HPLC resin particle under a videomicroscope." Biol.Pharm.Bull.21・8. 886-888 (1998)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Determination of insulin content in pancreatic beta cell line MIN6 cells by matrix-assisted laser desorption ionization time-of flight mass spectrometry." Biol.Pharm.Bull.21・11. 1240-1241 (1998)
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[Publications] 小澤孝一郎: "マスト細胞からのヒスタミン遊離の画像化" 医学のあゆみ. 188・3. 189-190 (1999)
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[Publications] Koichiro Ozawa: "Calcium mobilization in a pancreatic beta-cell line MIN6." Japan J. Pharmacol.in press. (1999)
