1998 Fiscal Year Annual Research Report
哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼBの解析
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09780619
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
関 政幸 東北大学, 薬学部, 助手 (70202140)
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| Keywords | DNA複製 / DNAヘリカーゼB / PCNA / 温度感受性変異株 |
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| Research Abstract |
マウス温度感受性変異株tsFT848細胞は、非許容温度でDNA複製低下及びDNAヘリカーゼB活性の低下が観察される。初年度ではヘリカーゼBがtsFT848細胞の温度感受性の真の原因遺伝子か決定する実験を行い、直接の原因であることをほぼ確定できた。本年度は、ヘリカーゼBがいつ・どこで・誰とDNA複製に関与するか特定することを試みた。
1) WHEN:DNAヘリカーゼBに対する抗体とReplication Forkに常に存在することが知られるPCNAに対する抗体を用いて、2者の関係を間接免疫2重染色法を用いて解析した。GO期でもDNAヘリカーゼBは核内にすでに存在するが、PCNAはS期に入ってからDNAと安定に複合体を形成することがわかった。
2) WHERE:PCNAとDNAヘリカーゼBはReplication Site(RS)で常に挙動をともにするわけではなく、PCNAと局在が一致するものもあればいないものもある。以上を総合すると、ヘリカーゼBはPCNAよりは先にRSに入りDNA複製の開始に影響を与えうるが、その後Replication Forkから解離すると考えられる。
3) WHO:two-hybridスクリーニングにて、ヘリカーゼBと相互作用する候補としてG/Tmismatch specific tymine DNA glycosylaseをクローニングした。G/TミスマッチはReplication Forkの通過前に修復される必要があり、DNA複製の開始付近で働くDNAヘリカーゼBとの相互作用は、ゲノムの配列の維持に重要な意味をもつ可能性がでてきた。
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[Publications] Wang,W-S.et al.: "Cloning of two isoforms of mouse DNA helicase Q1/RecQL cDNA; a forms expressed ubiquitously and β form specially in the testis." Biochimica et Biophysica Acta. 1443. 198-202 (1998)
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[Publications] Seki,T.et al.: "Cloning of a cDNA encoding a novel mouse Topo III β prossessing negatively supercoiled DNA-relaxing activity,whose message is highly expressed in the testis." Journal of Biological Chemistry. 273. 28553-28556 (1998)
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[Publications] Seki,T.,et al.: "cDNA cloning of mouse BLM gene,the homologue to human Bloom's syndrome gene,which is highly expressed in the testis at the mRNA level." Biochimica et Biophysica Acta. 1398. 377-381 (1998)
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[Publications] Seki,T.et al.: "Isolation of a cDNA encoding mouse DNA topoisomerase III which is highly expressed at the mRNA level in the testis." Biochimica et Biophysica Acta. 1396. 127-131 (1998)
