分裂酵母nda4サプレッサー遺伝子sna41のDNA複製開始における機能解析

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09780664
• Research Institution: Toho University
• Principal Investigator: 三宅 早苗 東邦大学, 医学部, 講師 (00256687)
• Keywords: licensing factor / DNA replication / nda4 / sna41

Research Abstract

1細胞周期につき、DNA複製を1回に限定するという制御系において、ライセンス因子が重要な役割を果たしている。ライセンス因子の候補であるMCMファミリーに属する分裂酵母nda4変異株のサプレッサーsna41変異株を単離した。本研究では、sna41産物が、DNA複製時にMCM蛋白質とどの様に関わりながら機能するか、メカニズムを明らかとする事を目的とする。
sna41産物はDNA複製に関与することが示されているので、DNA複製に欠損を示す変異株と二重変異株を作製し、遺伝子間の関係を調べた。sna41変異は、nda1と合成致死を示したが、同じMCM変異株でもcdc21やmis5と、あるいはORCのサブユニットであるORC1の変異cdc30とは合成致死も変異抑圧も示さなかった。このことから、sna41遺伝子は、nda4遺伝子のみならず、nda1遺伝子とも密接な関係があり、さらに、同じMCMに属するファミリーの中でも特にnda1とnda4遺伝子が関係が深いことが示された。また、sna41産物の局在を調べるため、C末端にGEPを融合したSna41-GFPをコードする遺伝子を発現するプラスミドを作製し、分裂酵母菌株に導入し、GFPを指標としてsna41産物の発現を蛍光顕微鏡で調べた。このSna41-GFP融合蛋白質はsna41変異株の相補能はあったが、蛍光顕微鏡観察による発現は認められなかったことから、sna41産物は細胞内にごく微量しか存在しない可能性が示唆された。さらに、sna41産物の機能発現を調べる目的で、細胞分裂周期突然変異株cdc25を用いた同調培養を行い、細胞周期におけるsna41産物の変動をウエスタンブロット法により調べた。発現量は、細胞周期においてほぼ一定であり、機能発現において、蛋白質量以外の制御系が働いていることが示唆された。

Research Products

• [Publications] S,Miyake and S.Yamashita: "Identification of sna41 gene,which is the suppressor of nda4 mutation and is involved in DNA replication in Schizosaccharomyces pombe" Genes to Cells. (in press).