1997 Fiscal Year Annual Research Report
アミロイド蛋白脳内沈着におよぼすプレセニリンの作用
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09835024
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Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Research Institution | Tokyo Institute of Psychiatry |
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Principal Investigator |
森 啓 (財)東京都精神医学総合研究所, 分子生物学研究部門, 副参事研究員 (10159189)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐原 成彦 (財)東京都精神医学総合研究所, 技術部, 研究員 (40261185)
宇佐美 美穂子 (財)東京都精神医学総合研究所, 技術部, 研究員 (10261182)
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| Keywords | アルツハイマー病 / プレセニリン-1 / 突然変異 / 家族性アルツハイマー病 / アミロイド蛋白 |
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| Research Abstract |
早期発症型家族性アルツハイマー病の原因遺伝子プレセニリンl(PS1)は467残基のアミノ酸からなる膜タンパク質であることが知られている。トランスジェニックマウスおよび培養細胞等の解析から、このPS-1の突然変異がアミロイド繊維の主成分であるAβ42を増加させることが明らかとなってきた。このことは、PS-1がAβの前駆体タンパク質(APP)の代謝過程に大きく関与していることを示唆している。そこで本研究では、PS-1蛋白とAPPの関連性について培養細胞を用いて解析した。
APP695cDNAを安定的に遺伝子導入したCHO細胞(CHO695)に、PS1遺伝子を一過性に導入した。得られた遺伝子導入細胞から、PS1のN末抗体AD3N、C末抗体CC3およびAPPのC末抗体R37を用いて、PS1およびAPPを免疫沈降させた。免疫沈降物はSDS電気泳動後PVDF膜に転写し、PS1のN末抗体PSN2、ループ部抗体AD3L、抗APP抗体22C11、抗Aβ抗体6E10およびAPPのC末抗体R37を用いて解析した。
その結果PS1導入CHO695細胞からAD3NおよびCC3を用いて免疫沈降させた画分には22C11によるAPPの免疫反応は見られず、一方、C末抗体R37を用いて免疫沈降させた画分にはPSN2およびAD3LによるPS1の免疫反応は見られなかった。また、PS1導入CHO695細胞およびPS1A260V導入CHO695と未導入CHO695細胞から得られたAPPおよびその誘導体を比べてみるとαおよびβ分泌酵素によるプロセシングの割合、切断部位については差は見られなかった。以上のことからCHO695細胞においては、PS1とAPPが結合して存在する可能性およびPS1が直接APPのαおよびβ分泌酵素による切断に関与する可能性は低いと考えられた。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] ISHii,K.,Tamaoka,A.,Mizusawa,H.et al.: "Aβ1-40 but not Aβ1-42 levels in cortex correlate with apolipoprotein E e4 allele dosage in sporadic Alzheimer's disease" Brain Res.748. 250-252 (1997)
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[Publications] Ishii,K.,li,K.,Hasegawa,T.et al.: "Increased Aβ42(43)-plaque deposition in early-onset familial Alzheimer's disease brains with the deletion of exon 9 and the missense point mutation(H163R)in the PS-1 gene" Neurosci.Lett.228. 17-20 (1997)
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[Publications] Sawamura,N., Tamaoka, A.,Shoji,S.-l.et al.: "Characterization of amyloid β protein species in cerebral amyloid angiopathy of a cynomolgous monkey by immunocytochemistry and enzyme-linked immunosorbent assay" Brain Res. 764. 225-229 (1997)
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[Publications] Okochi,M.,Ishii,K.,Usami,M.et al.: "Proteolytic processing of presenilin-1(PS-1)is not associated with Alzheimer's disease with or without PS-1 mutations" FEBS Lett.418. 162-166 (1997)
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[Publications] Yamamoto,A., Takagi,H.,Kitamura,D.et al.: "Deficiency in Protein L-isoaspartyl Methyltransferase Results in a Fatal Progressive Epilepsy" J.Neurosci.(in press). (1997)
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[Publications] Tamaoka,A.,Fraser,P.E.,Ishii,K.et al.: "Amyloid-β-protein isoforms in brain of subjects with PS1-linked,βAPP-linked and sporadic Alzheimer's disease" Mol.Brain Res.(in press). (1998)
