IL-7レセプター欠失マウスによるリンパ球の分化・増殖機構の解析

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09836005
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 生田 宏一 京都大学, 医学研究所, 助教授 (90193177)
• Keywords: サイトカイン / T細胞 / トランスジェニックマウス

Research Abstract

IL-7R欠失マウスでは、リンパ球の分化が強く障害され、末梢のαβT細胞とB細胞が著明に減少する。中でも、γδT細胞はすべての組織において完全に欠落している。本研究の目的は、IL-7R欠失マウスにTCRγδトランスジーンを導入して、γδT細胞の増殖・維持におけるIL-7Rの役割をTCRγ遺伝子の組換えとは切り離して調べることにある。γδTCRトランスジェニック(Tg)マウスとしては、皮膚dendritic epidemal T cells(DETC)由来のVγδVδ1TCRTgマウスとBALB/cヌードマウス由来のアロTla反応性のVγ2Vδ5TCRTgマウス(Tonegawa博士より入手済)の2種類を用いた。TgマウスをIL-7R+マウスに2回戻し交配し、IL-7R+/-・Tg^-(コントロールマウス)、IL-7R+・Tg^-(ノックアウトマウス)、IL-7R+/-・Tg^+、IL-7R+・Tg^+の4種類の遺伝子型を持つマウスを得た。それぞれのマウスの胸腺、膵臓、小腸上皮、皮膚よりリンパ球を回収し、γδT細胞が回復しているかどうかをTCRαβ、TCRγδ、CD3、Vγ3、Vγ2等の抗体により染色しFACSにて解析した。さらに、皮膚より上皮シートを単離しTCRγδ、Vγ3、Thy-1等の抗体で蛍光組織染色し、DETCが存在するかどうかを蛍光顕微鏡にて観察した。その結果Vγ3T細胞は成獣胸腺中でわずかしか検出されなかった。一方、皮膚上皮内にはVγ3トランスジーンを発現したγδT細胞がコントロールマウスと同等数存在した。一方、Vγ2T細胞は胸腺や膵臓ではわずかしか検出されなかったが、小腸上皮内にはVγ2トランスジーンを発現したγδT細胞がかなり存在し、完全ではないがある程度の回復を示した。以上の結果から、IL-7RはγδT細胞の胸腺内の増殖や生存に必須の役割を果たしていること、皮膚や小腸の上皮内での増殖や生存には必須ではないことが示された。

Research Products

• [Publications] Sunaga,S.et al.: "Efficient removal of loxp-flanked sequenoes in a genetargeted loous by transier expression of Cre recombinase in fertilized eggs" Mol.Reprod.Dev.46. 109-113 (1997)
• [Publications] Sunaga,S.et al.: "Myeloid differentiation is impaired in transgenic mice with targeted expression of a dominant negative form of retinoid receptor β" Brit.J.Haematol.96. 19-30 (1997)
• [Publications] Ishii,S.et al.: "Bronchial hyperreactivity, increased endotoxin lethality and melanocytic tumorigenesis in transgenic mice overexpressing plateletactivating factor recep" EMBO J.16. 133-142 (1997)
• [Publications] Sunaga,S.et al.: "Developmentally ordered V-J recombination in mouse T cell receptor γ locus is not perturbed by targeted deletion of the Vγ4 gene" J.Immunol.158. 4223-4228 (1997)
• [Publications] Takeuchi,T.et al.: "Murine interleukin 4 transgenic heart allograft survival prolonged with downrequlation of the Th1 cytokine mRNA in grafts" Transplantation. 64. 152-157 (1997)
• [Publications] Miyaura,C.et al.: "Increased B-lymphopoiesis by Interleukin 7 induces bone loss in mice with intact ovarian function:Similarity to estrogen deficiency" Proc.Natl.Acad.Sci.USA.94. 9360-9365 (1997)
• [Publications] Uozumi,N.et al.: "Role of cytosolic phospholipase A_2 in allergic response and parturition" Nature. 390. 618-622 (1997)
• [Publications] Adachi,S.et al.: "Essential role of IL-7 receptor α in the formation of Peyer's patch anlage" Int.Immunol.10. 1-6 (1998)