1997 Fiscal Year Annual Research Report
染色体位置情報を利用した直接的有用遺伝子単離法の開発
| Project/Area Number |
09876002
|
|---|
| Research Institution | Yokohama City University |
|---|
Principal Investigator |
荻原 保成 横浜市立大学, 木原生物研究所, 助教授 (40185533)
|
|---|
| Keywords | マップベースクローニング / AMF法 / PCR / CPNA / 穂の形態形成 / 染色体部分欠失系統 / 遺伝地図 / 形質転換 |
|---|
| Research Abstract |
コムギにおける染色体位置情報に基づいた直接的遺伝子単離法の確立のため、(1)コムギの穂の形態を制御するQ遺伝子、(2)T.timopheeviの細胞質雄性不稔を回復するRf3遺伝子、(3)Aegilops crassaの日長感応性細胞質雄性不稔を回復するRfD1遺伝子をそれぞれコムギ染色体上、5AL,1BS,7BLにRFLPマーカーを用いて詳細にマッピングした。今年度はQ遺伝子にターゲットを絞った。Q遺伝子は5AL上、Xcdo1168から4.8cM,Xpsr370から4.1cMの位置にマッピングした。マッピングした遺伝地図と染色体部分欠失系統を用いた細胞学的地図を共通したDNAマーカーで構築し、両者を対応付け、コムギ染色体上でのDNAマーカーの座乗領域を明らかにした。さらに、Q遺伝子が欠失している5ALに関する染色体部分欠失系統q5と正常系統の穂の原基が形成される幼穂から全RNAを抽出した。Poly(A)^+RNAを抽出し、2重鎖cDNAを合成した。cDNAをTaqIで消化し、アダプターを連結し、PCRにより正常系統特異的mRNAを選抜した(Amplified Fragment Length Polymorphism(AFLP)-based mRNA Fingerprinting)。正常系統特異的cDNAをプラスミドベクターにクローニングした。都合、84種類の正常系統特異的クローンがえられた。これらのクローンの(1)DNAシークエンスを決定する、(2)ノーザンブロット解析により転写の組織特異的発現を確認する、(3)サザンハイブリダイゼーションにより、座乗染色体領域を決定し、Q遺伝子と組み換え価0のものを選抜する、ことによりQ遺伝子を捕捉したいと計画している。
|
Research Products
(4 results)
-
[Publications] Kojima,T.et al.: "Genetictinkage map of ISSR count RAPD markers in Einkorwu heat in relation to that of RFLP markers" Theoretical and Applied Genetics. 96. 37-45 (1998)
-
[Publications] Kojima,T.et al.: "High-resalution RFLP mapping of the fertibity restoration(Rf3)gene against Tritium timophersi aptoplasm located on chremosome IBS of comrnnwhent" Genes and Genetic Systems. 72. 353-359 (1997)
-
[Publications] Kojima,T.and Ogihara,Y.: "High-resalution RFLP map of thelnyarn of chremosome SA in wheat and its syntery ammy cerials" Genes and Genetic Systems. (in press). (1998)
-
[Publications] Ogihara Y.et al.: "Clorning of cDNA specifically expressed in whert spikelets as the heading stage,as identified by the simple differentical display method" Plant Science. (in press). (1998)
