1997 Fiscal Year Annual Research Report
卵胞顆粒層細胞にのみ特異的にアポトーシスを誘導する新規な細胞死受容体の探索
Project/Area Number |
09876080
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
眞鍋 昇 京都大学, 農学研究科, 助教授 (80243070)
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Keywords | 卵胞 / 顆粒層細胞 / アポトーシス / モノクロナール抗体 / ブタ卵巣 / 細胞死受容体 / カスパーゼ / 免疫化学 |
Research Abstract |
哺乳類の卵巣においては、周期的に一定数の卵子が排卵される過程で99%以上の細胞がその発育過程において選択的に死滅する。近年、この卵胞選抜機構に顆粒層細胞アポトーシスが支配的に関与していることが分かってきた。顆粒層細胞にアポトーシスを誘起させる新規細胞死受容体を探索すべく、顕微鏡下に容易に構成細胞を分離調製できるブタ卵巣を材料とし、顆粒層細胞にのみ局在する膜結合性糖蛋白(新規細胞死受容体)を特異的に認識するモノクロナール抗体を作成した。このい抗体はIgMクラス抗体で、蛍光抗体法およびウエスタンブロット法では、顆粒層細胞とのみ反応し、胸線、肝、精巣など既知の細胞死受容体であるFasが局在する器官を含めて他の器官では陽性反応を検出できなかった。初代培養顆粒層細胞の培地にこの抗体を1μl以上添加して3時間以上培養した場合、特異的にアポトーシスを誘導できた。この抗体によって誘導されるアポトーシスは、培地中にカスパーゼ様プロテアーゼ阻害剤を添加すると、その幾つかで阻害された。分子量、等電点、カスパーゼ様プロテアーゼ阻害剤に対する阻害スペクトルなどの生化学的特性、免疫化学的特性、組織化学的局在などが細胞死受容体であるFas/TNF受容体ファミリーに類似するものの、既知の何れとも異なることから、卵胞にのみ局在する新規な細胞死受容体であると考えられる。現在、この新規細胞死受容体をコードするmRNAを同定するとともに、これに結合する糖鎖構造の解析を進めている。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] 眞鍋 昇ら: "Apoptosis occurs in granulosa cells but not cumulus cells in the atretic antral follicles in the porcine ovaries." Journal of Reproduction and Development. 43・1. 179-180 (1997)
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[Publications] 眞鍋 昇ら: "Apoptosis occurs in granulosa cells but not cumulus cells in the atretic graafian follicles in multiparous pig ovaries." Acta Histochemica et Cytochemica. 30・1. 85-92 (1997)
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[Publications] 眞鍋 昇ら: "Monoclonal antibodies against pig ovarian follicular granulosa cells induce apoptotic cell death in cultured granulosa cells." The Journal of Veterinary Medical Science. 59・5. 641-649 (1997)
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[Publications] 眞鍋 昇ら: "Involvement of Fas antigen in ovarian follicular atresia and leuteolysis." Molecular Reproduction and Development. 47・1. 11-18 (1997)
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[Publications] 眞鍋 昇ら: "Histochemical examination of cellular carbohydrate chains which change during ovarian follicular atresia in the porcine ovary." Journal of Japan Embryo Transfer Society. 19・1. 101-110 (1997)
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[Publications] 眞鍋 昇ら: "Retinoic acid induces malformations related to cell death in the developing mouse embryo." Journal of Reproduction and Development. 43・1. 59-64 (1997)
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[Publications] 眞鍋 昇ら: "Advances in comparative endocrinology:A Monoclonal antibody against pig ovarian follicular granulosa cells recognizes a novel cell death receptor" Monduzzi Editore Spa.,Bologna,Italy, 1793 (1997)
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[Publications] 眞鍋 昇ら: "Reproductive biology update:Regulatory mechanisms of granulosa cell apotosis in porcine ovarian follicle atresia." Shoukadoh Pub.Co.,Kyoto,Japan., 498 (1997)