1998 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝子組み換え抗腫瘍抗体の新らしいヒト型抗体作製法の開発
| Project/Area Number |
09877230
|
|---|
| Research Institution | Wakayama Medical University |
|---|
Principal Investigator |
岩橋 誠 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 (70244738)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
角田 卓也 和歌山県立医科大学, 医学部, 助手 (30275359)
山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (20191190)
|
|---|
| Keywords | ヒト型抗体 / targetting immunotherapy / CDR |
|---|
| Research Abstract |
CDR-humanized CC49のaffinity competition RIA assay
CDRを1種または2種づつ入れ替えた7種類のCDRヒト型化variant HuCC49について、^<125>I-labeled humanized CC49をcompetitorとしてcompetition RIA assayを行った。H鎖とL鎖variantsはCDR1、CDR2あるいはその両者を入れ替えてもaffinityは変化しなかったが、CDR3を入れ替えるとほとんどcompetitionを認めなかった。H鎖のvariantはいずれもaffinityが低下したが、CDR2のみ部分的なcompetitionを認めた。Affinity costantでもL鎖のCDR1,CDR2を入れ替えてもaffinityは変化せず,H鎖ではCDR2を入れ替えると1/300に低下し、CDR1,CDR3を入れ替えるとaffinityを認めなくなった。すなわち、L鎖CDR1とCDR2をヒトアミノ酸と入れ替えることは可能であり、H鎖CDR2は部分的に入れ替え可能であることが示唆された。
CDR-partial humanizationによるCDR-humanized CC49の作製と発現・精製、Competitionassay
以上の結果に基づき、入れ換えることによりaffinityを低下させないCDRはすべてヒト由来のCDRと入れ換え、入れ換えによりaffinityを低下させてしまうCDRは抗idiotype抗体と反応性の高いCDRを中心に、Padranらのspecificity determining regions(SDRs)に相当するアミノ酸はそのままで、他をヒト由来のアミノ酸と入れ換えることとし、CDRヒト型化CC49遺伝子と同様にしてPCRを利用して組換え遺伝子を作製した。SDRsに含まれないH鎖CDR2のアミノ酸をヒト由来のものと入れ替えた(60:Asn→Ser,61:Glu→Gln,62:Arg→Lys,64:Lys→Gln)H2M60-62,64を作製し、同様にL鎖のCDR1,2を完全にヒトアミノ酸と入れ替えCDR3はSDRsに属さないアミノ酸を入れ替えた(97;Thr→Ser)L1,2+L3M97を作製した。Competition assayから得られたaffinity constant(×10^<-8>M)は親抗体HuCC49の3.2に対し、H2M60-62,64は2.22,L1,2+L3M97は1.42であり、これらH鎖variantとL鎖variantを組み合わせたH2M60-62/L1,2+L3M97でも1.15と軽度低下するのみであった。さらにH2M60-62/L1,2+L3M97のマウスCC49を投与された4名の患者血清との反応性を検討すると,HuCC49に比較して著しく低下し、controlと比較してもその反応性は平均1.4倍と極めて低免疫原性であった。
|
-
[Publications] Hiroki Yamaue: "Clinical effects of chemoimmurotherapy for patients with peritoneal carcinomatosis." Oncology Reports. 4. 583-589 (1997)
-
[Publications] Makoto Iwahashi: "Autologous mixed lymphocyte reaction and postoperative prognosis in patients with gastric carcinoma" Oncology Reports. 3. 45-48 (1996)
-
[Publications] Takuya Tsunoda: "CIinical efficacy of adoptive immunotherapy by IL-4 activated tumor-infiltrating ymphacytes in patients with advanced caaur" International Journal of Clinical Oncology. 2. 202-207 (1997)
-
[Publications] Takuya Tsunoda: "Clinical and functional analysis for the augmentation of tumor-infiltrating lymphocytes by interleukin 4" British Journal of Cancer. 74. 1085-1089 (1996)
-
[Publications] Hiroki Yamaue: "Clinical evaluation of Chemosensitivity testing for patients with colorectal cancer using NTTassay" Disease Colon Rectum. 39. 416-422 (1996)
