ヒト脳腫瘍におけるサイクリンGの発現と予後判定及びそのアンチセンス治療の試み

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09877270
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 清水 恵司 大阪大学, 医学部, 助教授 (50162699)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮尾 泰慶 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員
• Keywords: Glioma / Cyclin / CyclinG / Antisence / Apoptosis / Gene transfer / HVJ-Iiposome / Gene therapy

Research Abstract

高等真核細胞におけるサイクリンとしては、現在までにAからHまでの8種類のサイクリンが報告されており、その内サイクリンGは、当教室の田村によって初めて発見された(Oncogene8:2113-2118,1993)。そして最近になって、サイクリンGがP53と結合すること、そのアンチセンスの導入により、細胞にアポトーシスを誘導すること、さらには、悪性神経膠芽腫細胞株にサイクリンGが高発現していることも未発表ながら確認している。そこで我々は、サイクリンGが脳腫瘍にどのような影響を与えているかを調べると共に、サイクリンG以外にも脳腫瘍の発生に影響を与えているサイクリン、あるいはサイクリン様蛋白質の存在を解析した。現在までサイクリンGに対する有効な抗体が作製されていないので、強制発現している細胞を選別するのが困難であったが、GFP(green fluorescent protein)を付加することにより、サイクリンGもしくはアンチセンスを発現した細胞を簡単に識別できる可能性が見込まれたので、種々のグリオーマ細胞に、GFP融合サイクリンGコンストラクトの一過性の過剰発現を試みたが、GFPシステムがうまく働かないためか、サイクリンGの過剰発現が細胞に毒性があるためか、十分な蛍光光度を有する細胞は入手できていない。またアンチセンスRNA発現細胞株をクローニングする目的で、GFP融合アンチセンスサイクリンGの過剰発現を試みたが、同じ問題に直面している。一方、グリオーマ細胞に対するサイクリンGのアンチセンスオリゴによる影響は、Sオリゴの毒性のためにセンスオリゴとの間に有意差を見出せていない。その結果、マウス神経膠芽腫モデルは既に作製できているが、in vitroでの条件設定ができないのでin vivo治療実験は行っていない。また、神経膠芽腫細胞株、髄芽腫細胞株、神経芽腫細胞株よりRNAを抽出し、変性プライマーを用いたRT-PCRにより、サイクリンファミリーの解析を行ったが、既存のサイクリンであるG1、G2、I以外の新しいサイクリンをクローニングできていない。

Research Products

• [Publications] Moriuchi S: "Decreased N-myc expression in human medulloblastoma cell lines duringdifferentiation." Anticancer Res. 17. 301-306 (1997)
• [Publications] Tamura M: "Targeted killing of migrating glioma cells by injection of HTK-modified glioma cells." Hum Gene Ther. 8. 381-391 (1997)
• [Publications] Miyao Y: "Usefulness of a mouse myelin basic protein promoter for gene therapy of malignant glioma:myelin basic protein promoter is strongly active in human malignant glioma cells." Jpn Cancer Res. 88. 678-686 (1997)
• [Publications] Mabuchi E: "Gene delivery by HVJ-liposome in the experimental gene therapy of murine glioma." Gene Ther. 4. 768-772 (1997)
• [Publications] Miyao Y: "FT-175,a Synthetic Inhibitor ofthe Complement Pathway,Protects against the Inactivation of Infectious Retrovirus by Human Serum." Hum Gene Ther. 8. 1575-1583 (1997)
• [Publications] Kishima H: "Possible common origin of α-fetoprotein -and human chorionic gonadotropin-secreting cells in intracranial germ cell tumor." J Neurosurg. 88. 576-580 (1998)
• [Publications] Park KC: "Interferon yield MHC antigen expression of human medulloblastoma cells and its suppression during dibutyryl cyclic AMP-induced differentiation:" Cell Mol Neurobiol. in press. (1998)
• [Publications] Yamada M: "In vitro study on intrathecal use of 5-fluoro-2'-deoxyuridine(FdUrd)for meningeal dissemination of malignant brain tumors." J Neuro-oncol. in press. (1998)
• [Publications] Park KC: "Regulation of interferon responses in medulloblastoma cells by interferon regulatory factor-1 and -2." Br J Cancer. in press. (1998)
• [Publications] Shimizu K: "Internalization with high targeting potential of mouse monoclonal antibody ONS-M21 recognizing human malignant glioma antigen." Cancer lett. in press. (1998)
• [Publications] Kishima H: "Systemic interleukin-12 displays antitumor activity in the mouse central nervous system." Br J Cancer. in press. (1998)