悪性グリオーマ普遍発現遺伝子の検索とそのプロモーターを用いた組織特異的遺伝子治療

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09877272
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 早川 徹 大阪大学, 医学部, 教授 (20135700)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮尾 泰慶 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 清水 恵司 大阪大学, 医学部, 助教授 (50162699)
• Keywords: SAGE / Glioma / Promoter / Retrovirus / Gene therapy / RT-PCR

Research Abstract

悪性グリオーマに対する特異的遺伝子療法を開発する第一段階として、、ミエリン塩基性蛋白(MBP)遺伝子発現プロモータで殺細胞遺伝子を制御したレトロウイルスベクターを作製した(J Neurosci Res 36:472-479,1993)。しかし、そのプロモータ活性は、モロニ-白血病ウイルスのLTRやSV40プロモータなど組織非特異的プロモータと比較すると弱い。それ故、新しい遺伝子スクリーニング法であるSAGE(Serial analysis of gene expression)法を用いて、悪性グリオーマ普遍的発現遺伝子およびそのプロモータを検索し、より効率のよい遺伝子治療法の開発を計画した。今年度は、悪性グリオーマ患者の手術摘出組織やヒト悪性グリオーマ細胞株よりメッセンジャーRNA(mRNA)を抽出し、リバーストランスクリプターゼ(RT)法を用いてcDNAを合成した。さらに、poly A付加部位より9塩基のTagを作製し、これらを縦一列に配列した合計約500塩基からなるDNAを合成した後シークエンスを行い、グリオーマ手術摘出組織や各種細胞株より最も普遍的に発現している遺伝子をヒトゲノムデータベースより検索している段階である。今後は、悪性グリオーマ普遍的発現遺伝子を幾種類か決定し、それが既知のものであればその遺伝子プロモータを用いて、また未知の遺伝子であればそれをクローニングし、その遺伝子のプロモータ領域を用いて、1acZ遺伝子を制御する組換えベクターを作製する予定である。そして、このベクターを用いて、各ヒトグリオーマ細胞株におけるプロモータ活性を検討し、その中で一番活性の高いプロモータを用いて殺細胞遺伝子(HTK)を制御できるベクターを構築し、悪性グリオーマ特異的遺伝子治療の新たな基礎的研究を行う予定である。

Research Products

• [Publications] Moriuchi S: "Decreased N-myc expression in human medulloblastoma cell lines during differentiation." Anticancer Res. 17. 301-306 (1997)
• [Publications] Tamura M: "Targeted killing of migrating glioma cells by injection of HTK-modified glioma cells." Hum Gene Ther. 8. 381-391 (1997)
• [Publications] Miyao Y: "Usefulness of a mouse myelin basic protein promoter for gene therapy of malignant glioma:myelin basic protein promoter is strongly active in human malignant glioma cells." Jpn J Cancer Res. 88. 678-686 (1997)
• [Publications] Mabuchi E: "Gene delivery by HVJ-liposome in the experimental gene therapy of murine glioma." Gene Ther. 4. 768-772 (1997)
• [Publications] Miyao Y: "FT-175,a Synthetic Inhibitor ofthe Complement Pathway,Protects against the Inactivation of Infectious Retrovirus by Human Serum." Hum Gene Ther. 8. 1575-1583 (1997)
• [Publications] Kishima H: "Possible common origin of α-fetoprotein- and human chorionic gonadotropin-secreting cells in intracranial germ cell tumor." J Neurosurg. 88. 576-580 (1998)
• [Publications] Park KC: "Interferon yield MHC antigen expression of human medulloblastoma cells and its suppression during dibutyryl cyclic AMP-induced differentiation:" Cell Mol Neurobiol. in press. (1998)
• [Publications] Yamada M: "In vitro study on intrathecal use of 5-fluoro-2'-deoxyuridine(FdUrd)for meningeal dissemination of malignant brain tumors." J Neuro-oncol. in press. (1998)
• [Publications] Park KC: "Regulation of interferon responses in medulloblastoma cells by interferon regulatory factor-1 and -2." Br J Cancer. in press. (1998)
• [Publications] Shimizu K: "Internalization with high targeting potential of mouse monoclonal antibody ONS-M21 recognizing human malignant glioma antigen." Cancer lett. in press. (1998)
• [Publications] Kishima H: "Systemic interleukin-12 displays antitumor activity in the mouse central nervous system." Br J Cancer. in press. (1998)