子宮平滑筋腫瘍に特異的な遺伝子の検索

1997 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09877318
• Research Institution: Shinshu University
• Principal Investigator: 藤井 信吾 信州大学, 医学部, 教授 (30135579)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 塩原 茂樹 信州大学, 医学部, 助手 (30235501) ; 二階堂 敏雄 信州大学, 附属病院, 講師 (50180568)
• Keywords: 子宮筋腫 / 子宮筋肉腫 / differential display / PCR / cDNA / ジゴキシゲニンラベル / 塩基配列

Research Abstract

種々の婦人科腫瘍からdifferential display法で遺伝子を単離して、それぞれの遺伝子を正常、良性腫瘍、悪性腫瘍に分類し、それらの遺伝子の発現を指標として婦人科腫瘍の悪性度の度合いを診断する系を作ることを目的とした。患者の同意を得た上で、手術摘出材料から採取したそれぞれの組織より、採取組織の一部はホルマリン固定パラフィン包埋切片を作成し、H.E.染色により組織の確認をした。その上で、正常子宮平滑筋と子宮筋腫の組織は細切後にcollagenase処理を経てから、また子宮平滑筋肉腫の組織は細切のみ施し、1mlのISOGENを加えて溶解またはホモジネーションした。その後、クロロホルムを加えて遠心分離し、分かれた水相にイソプロパノールを加えてRNAを沈殿させて採取した。抽出したRNAから、逆転写酵素とジゴキシゲニンラベルしたプライマーを用いてcDNAを合成し、このcDNAをPCR法にて増幅した後、SDS-ポリアクリルアミドゲルにて電気泳動し分離した。同一ゲル上で正常子宮平滑筋・子宮筋腫・子宮平滑筋肉腫各組織に由来するcDNAの分布を比較した。その結果、ポリAテ-ルに相補的なプライマー3種とランダムプライマー8種の組み合わせによりDifferential Display法を行い特異的と思われる遺伝子及び、量的に発現が増加あるいは減少があると判断された遺伝子を数十個単離した。現在これらの遺伝子の子宮筋腫、子宮平滑筋、及び子宮筋肉腫での発現の特異的の確認を行っているところで、今後得られたcDNA断片の塩基配列等を解析して、その遺伝子の子宮筋腫における役割を検討する。

Research Products

• [Publications] Kobayashi,Y. et al: "Effects of GnRH analogue on human smooth muscle cells cultured from normal myometrial and from uterine leiomyomal tissues" Molecular Human Reproduction. 3・2. 91-99 (1997)
• [Publications] Mori,A. et al: "Distribution and heterogeneity of mast cells in the human uterus" Human Reproduction. 12・2. 368-372 (1997)
• [Publications] Mori,A. et al: "Analysis of stem cell factor for mast cell proliferation in the human myometrium" Molecular Human Reproduction. 3・5. 411-418 (1997)
• [Publications] Shiozawa,T. et al: "Immunohistochemical Detection of Cyclin A with Reference to p53 Expression in Endometrial Endometrioid Carcinomas" International Journal of Gynecological Pathology. 16・4. 348-353 (1997)
• [Publications] Shiohara,S. et al: "Histochemical Analysis of Estrogen and Progesterone Receptors and Gastric-Type Mucin in Mucinous Ovarian Tumors with Reference to Their Pathogenesis" Cancer. 80・5. 908-916 (1997)
• [Publications] Shiozawa,T. et al: "Immunohistochemical analysis of the expression of cdk4 and p16INK4 in human endometrioid-type carsinomas." Cancer. 80・12. 2250-2256 (1997)
• [Publications] 藤井信吾: "子宮肉腫" TODAY'S THERAPY 1997 (今日の治療指針). 709 (1997)
• [Publications] 藤井信吾: "子宮筋腫の診断" 実験治療. 645号. 5-10 (1997)
• [Publications] 二階堂敏雄 他: "子宮筋腫増殖機構の分子生物学的解析" 図説産婦人科VIEW27. 46-57 (1997)
• [Publications] 折井文香 他: "組織発生" 臨床婦人科産科. 51・12. 1248-1252 (1997)
• [Publications] 藤井信吾: "子宮筋腫" 別冊NHKきょうの健康 (これだけは知っておきたい子宮筋腫、子宮内膜症、月経異常). 76-96 (1997)