Differential display法による歯周病原因菌遺伝子の検出

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 09877366
• Research Institution: Hiroshima University
• Principal Investigator: 栗原 英見 広島大学, 歯学部, 教授 (40161765)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 日野 孝宗 広島大学, 歯学部, 助手 (20274102) ; 竹本 俊伸 広島大学, 歯学部, 助手 (00236506)
• Keywords: 早期発症型歯周炎 / 成人性歯周炎 / Differential display / 歯周ポケット内細菌 / Porphyromonas gingivalis / Actinobacillus actinomycetemcomitans / Prevotella intermedia

Research Abstract

1. 歯周ポケット内細菌のDNAマーカーの分離とDNAの解析
1) 歯周ポケット細菌からの直接Diffrential display
歯周ポケットから採取した細菌を直接Differential displayを行うと,安定した結果を得ることが出来なかった.
2) 歯周ポケット細菌の前培養とDifferential display
歯周ポケットから採取した細菌を初めにプレートに播種し増菌し,性状の異なるコロニーを単離しDifferential displayを行った.前培養,増菌という作業を加えることによって,安定した結果を得ることが出来た.
3) 標準菌株のDifferential display
Porphyromonas gingivalis,Actinobacillus actinomycetemcomitans,Prevotella intermediaなどの歯周病関連細菌の標準菌株をDifferential displayを行った結果,それぞれに特徴的なパターンを表示することが可能であった.
2. 歯周病病態と細菌DNAマーカー
1) 歯周炎の病態として,正常,早期発症型歯周炎,成人性歯周炎の患者からポケット内細菌を採取し,前述した前培養,増菌作業を行った後にDifferential displayを行った.研究計画に前培養,増菌作業が加わったことから,Differential displayだけで病態と関連する細菌DNAマーカーを同定することは出来ない事が明らかになった.
2) 歯周炎の病態が異なる,正常,早期発症型歯周炎,成人性歯周炎の患者から分離したポケット内細菌を採取し,プレートに播種し増菌し,性状の異なるコロニーを単離しDifferential displayを行った結果,病態ごとに異なる細菌をDifferential display法によってそのパターンの違いを表示することが可能なことが明らかになった.

Research Products

• [Publications] Sugai, M., et al.: "The cell cycle-specific growth-inhibitory factor produced by Actinobacillus actinomycetemcomitans is a cytolethal distending toxin." Infect.Immun.66. 5008-5019 (1998)