1999 Fiscal Year Annual Research Report

小型化抗体遺伝子導入による2次代謝活性成分の生合成制御に関する研究

Research Project

Project/Area Number	09877418
Research Institution	Kyushu University
Principal Investigator	正山征洋九州大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (70037604)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	田中宏幸九州大学, 大学院・薬学研究科, 助手 (30253470) 森元聡九州大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (60191045)
Keywords	抗フォルスコリンモノクローナル抗体 / scFV遺伝子 / フオルスコリン / Coleus forskohlii / 組換え植物 / フオルスコリン高含有株
Research Abstract	小型化抗体遺伝子を植物へ導入することにより、抗体と2次代謝産物とのコンプレックスを生成し、系外へ除去されることにより2次代謝産物の生合成経路のキャパシティーが増大し、より多量の2次代謝産物を生産蓄積するというアイディアに基ずくものである。 Agrobacteriumに組み換えるために、まず大腸菌でのscFVの発現系を構築した。抗forskolinMAb産生ハイブリドーマからmRNAを抽出し、逆転写によりcKNAを合成したVHとVLの可変部分に相補的なプライマーを用いてPCRを行いVH,VLを増幅した。VH,VLをペプチドリンカーにより連結しscFV遺伝子を構築する。このものをpET-28aベクターへ組み換えた。本ベクターを大腸菌BL21に形質転換し大量発現系を構築し、IPTGの添加によりscFVを発現させた。scFVはin clusion bodyとして発現するため尿素で可溶化し希釈法により巻き戻した後His-tagを用いたアフィニティーカラムにより精製を行うことによりscFVタンパクを得ることが出来た。本法によれば培地100nl当たり約6mgのscFVが得られる。現在までに抗forskolinMAb scFVとforskolinとのモデリングを行っている。現在scFV遺伝子を、Agrobacteriumに組み換え中で、今後forskolin含有Coleus horskohliiに組み換え植物体で発現させることによりforskolinの生合成をコントロールし、forskolin高含有株を作出すべく実験を進めている。

Research Products

(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] N.Fukuda et al: "Western blotting for ginseng saponins.Ginsenosides using anti-ginseno side Rbl monoclonal antibody."Biol.Pharm.Bull.. 22. 219-220 (1999)
[Publications] H.Tanaka et al: "Formation of monoclonal antibody against a major ginseng component.ginsenoside Rb1 and its characterization."Cytotechnology. 29. 115-120 (1999)
[Publications] W.Putakun et al: "Rapid separation of solasodine glycoside by animmunoaffinity cahin usin anti-salamorgine monoclonal antibody"cytotechnology. 31. 151-156 (1999)
[Publications] H.Tanaka et al: "Western blotting of steroidal alkaloid glycosides using monoclonal antibody against salamargine"J.Lip.Chrom.Rel.Technol.. 22(10). 1503-1512 (1999)
[Publications] L.Xuan et al: "Preparation of monoclonal ankibody against crocin and its character ization"Cytotechnology. 29. 65-70 (1999)
[Publications] S.J.Shan et al: "Western blotting method for theimmunostaining detection of glucuronides of glycyrrhetic acid using anti-glycyrrhizin monoclonal antibody"Biol.Pharm.Bull.. 22(2). 221-223 (1999)
[Publications] 正山征洋共著: "21世紀の生薬・漢方製剤"繊維社企画出版. 432 (1999)
[Publications] 正山征洋共著: "薬用植物栽培と品質評価 Part8"薬事日報社. 59 (1999)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

小型化抗体遺伝子導入による2次代謝活性成分の生合成制御に関する研究

Principal Investigator

正山 征洋 九州大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (70037604)

Research Products

[Publications] N.Fukuda et al: "Western blotting for ginseng saponins.Ginsenosides using anti-ginseno side Rbl monoclonal antibody."Biol.Pharm.Bull.. 22. 219-220 (1999)

[Publications] H.Tanaka et al: "Formation of monoclonal antibody against a major ginseng component.ginsenoside Rb1 and its characterization."Cytotechnology. 29. 115-120 (1999)

[Publications] W.Putakun et al: "Rapid separation of solasodine glycoside by animmunoaffinity cahin usin anti-salamorgine monoclonal antibody"cytotechnology. 31. 151-156 (1999)

[Publications] H.Tanaka et al: "Western blotting of steroidal alkaloid glycosides using monoclonal antibody against salamargine"J.Lip.Chrom.Rel.Technol.. 22(10). 1503-1512 (1999)

[Publications] L.Xuan et al: "Preparation of monoclonal ankibody against crocin and its character ization"Cytotechnology. 29. 65-70 (1999)

[Publications] S.J.Shan et al: "Western blotting method for theimmunostaining detection of glucuronides of glycyrrhetic acid using anti-glycyrrhizin monoclonal antibody"Biol.Pharm.Bull.. 22(2). 221-223 (1999)

[Publications] 正山征洋 共著: "21世紀の生薬・漢方製剤"繊維社企画出版. 432 (1999)

[Publications] 正山征洋 共著: "薬用植物栽培と品質評価 Part8"薬事日報社. 59 (1999)

正山征洋九州大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (70037604)

[Publications] 正山征洋共著: "21世紀の生薬・漢方製剤"繊維社企画出版. 432 (1999)

[Publications] 正山征洋共著: "薬用植物栽培と品質評価 Part8"薬事日報社. 59 (1999)