1997 Fiscal Year Annual Research Report

新たに見出した1価陽イオンポンプ触媒鎖N末端の多重リン酸化の意義解明の糸口

Research Project

Project/Area Number	09878131
Research Institution	Hokkaido University
Principal Investigator	谷口和弥北海道大学, 大学院・理学研究科, 教授 (40028204)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	島田明北海道大学, 大学院・理学研究科, 講師 (60001848) 今川敏明北海道大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (20142177) 嘉屋俊二北海道大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (90186023)
Keywords	H^+,K-ATPase / チロシンキナーゼ / セリンキナーゼ / カルシウム / Na / K-ATPase
Research Abstract	H,K-ATPase(GI画分)にCaを添加して内在性キナーゼによるリン酸化反応を行ったところ、Ca濃度に依存(K1/2=1.6μM)してα鎖N末端セリン残基のリン酸化量が増加した。界面活性剤CHAPS存在下では、α鎖のリン酸化量は減少し、Ca濃度依存性も消失したが、PKC活性化剤TPAの依存下における∂鎖のセリン残基のリン酸化は、CHAPSの有無に関わらず、PKC特異的阻害剤で阻害された。セリンキナーゼの基質としてH,K-ATPase∂鎖N末端のTyr7、Tyr10を共にPheに変異させた融合蛋白(Y7,10F)、あるいは合成基質POLY(Arg:Ser=3:1)を用いると、CHAPS存在下でのリン酸化はCaの添加に依存せず〜3倍以上に増加した。CHAPS存在下でのY7,10Fのリン酸化はCaの添加の有無に依存せず、TPAによって約1.5倍に促進され、PKC特異的阻害剤でほぼ完全に阻害された。また、GI画分で抗PKC抗体との反応性が検出された。以上の結果より、H,K-ATPase標品にはPKCが内在し、この酵素が、内在するチロシンキナーゼがTyr10とTyr7をリン酸化するのと同様に、膜結合、H,K-ATPaseの∂鎖Ser27を特異的にリン酸化することが明らかになった。さらに種々のキナーゼに対する抗体を用いてこれらを同定した結果、セリンキナーゼは少なくともPKC,αとβII、チロシンキナーゼはSRCに関連をもった。しかし従来報告されているSRCとは異なる新たなチロシンキナーゼであることが明白となった。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] D.J.Kane: "Stopped-Flow Kinetic Invegtigation of Conformational changes of Piy Kidney Na^+,K^+-ATPase." Biochemistry. Vol36,No43. 13406-13420 (1997)
[Publications] T.TSUDA: "Are Phyidoxal and Fluoregcein Prabes in Lysine Regldues of α-chain in Na^+,K^+-ATPase Senging ATP Binding?" Ann.N.Y.Acad Sci.834. 186-193 (1997)
[Publications] J.P.FROEHLICH: "Complex Kinetic Behavior in the Na,K-and Ca-ATPases" Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 280-296 (1997)
[Publications] K.TOGAWA: "Phosphorylation of Tyr^7,Tyr^<10>,and Ser^<27> of α-chain in Na^+,K^+-ATPase by Intrinsic and Extrinsic Kinases" Ann.N.Y.Acid Sci.834. 582-584 (1997)
[Publications] S.KAYA: "Cloning of the Eel Electroplax Na^+,K^+ATPase α Subunit" Ann.N.Y.Sci.834. 129-131 (1997)
[Publications] H.Eguchi: "ATP-Induced pynamic Fluorescence changes of a N〔1-(2-Benzimidazolyl)pheny1〕maleimide probe at cys in the α-chain of Pig Stomach H^+,K^+ATPase" J.Biochem. 122. 659-665 (1997)
[Publications] T.TSUDA: "Fluorescein 5′-Tsothiocyanate-Modified Na,K-ATPase,at Lys-501 of the α-Chain,Accepts ATP Independent of Pyridoxal 5′-Diphosphc-5′-Adenosine Modification at Lys-480" J.Biochem. 123. 169-174 (1998)

1997 Fiscal Year Annual Research Report

新たに見出した1価陽イオンポンプ触媒鎖N末端の多重リン酸化の意義解明の糸口

Principal Investigator

谷口 和弥 北海道大学, 大学院・理学研究科, 教授 (40028204)

Research Products

[Publications] D.J.Kane: "Stopped-Flow Kinetic Invegtigation of Conformational changes of Piy Kidney Na^+,K^+-ATPase." Biochemistry. Vol36,No43. 13406-13420 (1997)

[Publications] T.TSUDA: "Are Phyidoxal and Fluoregcein Prabes in Lysine Regldues of α-chain in Na^+,K^+-ATPase Senging ATP Binding?" Ann.N.Y.Acad Sci.834. 186-193 (1997)

[Publications] J.P.FROEHLICH: "Complex Kinetic Behavior in the Na,K-and Ca-ATPases" Ann.N.Y.Acad.Sci.834. 280-296 (1997)

[Publications] K.TOGAWA: "Phosphorylation of Tyr^7,Tyr^<10>,and Ser^<27> of α-chain in Na^+,K^+-ATPase by Intrinsic and Extrinsic Kinases" Ann.N.Y.Acid Sci.834. 582-584 (1997)

[Publications] S.KAYA: "Cloning of the Eel Electroplax Na^+,K^+ATPase α Subunit" Ann.N.Y.Sci.834. 129-131 (1997)

[Publications] H.Eguchi: "ATP-Induced pynamic Fluorescence changes of a N〔1-(2-Benzimidazolyl)pheny1〕maleimide probe at cys in the α-chain of Pig Stomach H^+,K^+ATPase" J.Biochem. 122. 659-665 (1997)

[Publications] T.TSUDA: "Fluorescein 5′-Tsothiocyanate-Modified Na,K-ATPase,at Lys-501 of the α-Chain,Accepts ATP Independent of Pyridoxal 5′-Diphosphc-5′-Adenosine Modification at Lys-480" J.Biochem. 123. 169-174 (1998)

谷口和弥北海道大学, 大学院・理学研究科, 教授 (40028204)