2010 Fiscal Year Annual Research Report
複製開始及び染色体分配制御に関与する新規ヒストン結合蛋白質GRWD1の解析
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09J07233
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
杉本 のぞみ 九州大学, 大学院・薬学研究院, 特別研究員(PD)
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| Keywords | GRWD1 / Cdt1 / DNA複製 / CDC6 / アフリカツメガエル卵抽出液 / 細胞周期 |
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| Research Abstract |
GRWD1(glutamate-rich WD40 repeat domain 1)は、複製開始の細胞周期制御において中心的な役割を担っているCdt1の新規結合タンパク質として同定された因子である。この因子の機能解明を目的とし、研究を行っている。
ChIP assay(クロマチン免疫沈降法)により、ヒトGRWD1のクロマチンへの結合を検討した。その結果、GRWD1は複製オリジンに結合し、G1期にその結合量が著しく増加した。このような結合パターンは、ライセンシング因子のパターンと酷似しており、GRWD1がライセンス補助因子である可能性が示唆された。また、siRNA法を用いてCdt1の発現を抑制させ、ChIP assayを行ったところ、GRWD1の複製オリジンへの結合が低下した。一方、Cdt1過剰発現細胞を用いてChIP assayを行ったところ、GRWD1の複製オリジンへの結合が増加した。これらの結果は、GRWD1はCdt1依存的に複製オリジンに結合することを示唆している。今後は、ライセンシング因子の複製オリジンへの集積が、GRWD1 siRNAによって低下するのかを調べたい。さらに、CDC6 siRNAにより、GRWD1の複製オリジンへの結合量が影響を受けるのかも調べたい。
GRWDIが内部に持つWD40ドメインは、ヒストンシャペロンであるCAF1と相同性が高い。また、酸性アミノ酸に富むドメインも持つが、既知のヒストンシャペロンは酸性アミノ酸領域を持つことが多いことから、GRWD1は新規ヒストンシャペロンではないかとの仮説をたて、検証を進めている。その結果、GRWD1はヒストンと結合し、その結合には酸性アミノ酸領域が必要であること、およびmononucleosome assembly assayにより、ヒストンシャペロン様活性を持つことが示された。今後、更なる解析を重ね、GRWD1が新規ヒストンシャペロンであることの確証を得たい。
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