線溶系(PA-plasmin cascade)調節機構の解析

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10044216
• Research Institution: Nihon University
• Principal Investigator: 関 泰一郎 日本大学, 生物資源科学部, 助教授 (20187834)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宇野 茂之 日本大学, 医学部, 助手 (90307851) ; 有賀 豊彦 日本大学, 生物資源科学部, 教授 (50096757)
• Keywords: PAI-1 / liver / hepatocyte / TGFβ / plasminogen activator

Research Abstract

Plasminogen activator(PA)と、PAの阻害タンパク質であるtype-1 PA inhibitor(PAI-1)は、PA-plasmin cascadeのtriggerとPA活性の生理的調節物質として重要な因子である。本研究では、PA-plasmin cascadeの調節機構について主にPAI-1の遺伝子発現の調節機構について追究し、以下の知見を得た。
1)培養肝細胞を用いて線溶活性の調節とPA,PAI-1遺伝子発現の関連について検討した。すでにIL-1やTNFαによる線溶活性の低下がPAI-1mRNA発現の誘導に加え、tissue-type PA(tPA)の産生量の低下によることを明らかにしたが、本年度はtPAのクリアランスに係わる受容体の動態について検討し、low density lipoprotein related/α_2-macroglobulin receptor(LRP)が肝細胞においてtPAの取りこみに係わる主要な受容体であること、LRP遺伝子発現がIL-1により増大することを明らかにした。
2)TGFβによるPAI-1転写誘導機構について検討し、smad3とグルココルチコイド受容体のクロストークによる調節機構を明らかにした。
3)サイクリックヌクレオチドによるPAI-1mRNAのdown-regulationは、3'-非翻訳領域の134ntが重要であること、この領域に結合する38-76kDaのタンパク質がmRNAの不安定性に関与することを明らかにした。これらのタンパク質の1つをクローニングし解析したところ新規たんぱく質であることが明らかとなりPAI-RBP1と命名した。PAI-RBP1はRGG box,2つのarginine-rich regionを有することを明らかにした。
4)活性型PAI-1と潜在型PAI-1の活性中心についてX線回折により検討した。

Research Products

• [Publications] Seki T,Tsuji K,Hayato Y,Moritomo T,Ariga T: "Garlic and onion oils inhibit proliferation and induce differentiation of HL-60 cells."Cancer Lett. 160(1). 29-35 (2000)
• [Publications] Seki T,Healy AM,Fletcher DS,Noguchi T,Gelehrter TD.: "IL-1beta mediates induction of hepatic type 1 plasminogen activator inhibitor in response to local tissue injury."Am J Physiol.. 277(4 Pt 1). G801-9 (1999)
• [Publications] Heaton JH,Dlakic WM,Dlakic M,Gelehrter TD.: "Identification and cDNA Cloning of a Novel RNA-binding Protein That Interacts with the Cyclic Nucleotide-responsive Sequence in the Type-1 Plasminogen Activator Inhibitor mRNA."J Biol Chem.. 276(5). 3341-3347 (2001)
• [Publications] White LA,Bruzdzinski C,Kutz SM,Gelehrter TD,Higgins PJ.: "Growth state-dependent binding of USF-1 to a proximal promoter E box element in the rat plasminogen activator inhibitor type 1 gene."Exp Cell Res.. 260(1). 127-35 (2000)
• [Publications] Song CZ,Tian X,Gelehrter TD.: "Glucocorticoid receptor inhibits transforming growth factor-beta signaling by directly targeting the transcriptional activation function of Smad3."Proc Natl Acad Sci USA.. 96(21). 11776-81 (1999)
• [Publications] Leng HM,Brouwers E,Knockaert I,Declerck PJ.: "Immunoassays for the quantitation of porcine PAI-1 antigen and activity in biological fluid samples."Thromb Haemost.. 84(6). 1082-6 (2000)
• [Publications] Vleugels N,Leys J,Knockaert I,Declerck PJ.: "Effect of stabilizing versus destabilizing interactions on plasminogen activator inhibitor-1."Thromb Haemost.. 84(5). 871-5 (2000)
• [Publications] Vleugels N,Leys J,Knockaert I,Declerck PJ.: "Effect of stabilizing versus destabilizing interactions on plasminogen activator inhibitor-1."J Pharm Belg.. 55(2). 57-8 (2000)
• [Publications] Nar H,Bauer M,Stassen JM,Lang D,Gils A,Declerch PJ.: "Plasminogen activator inhibitor 1.Structure of the native serpin,comparison to its other conformers and implications for serpin inactivation."J Mol Biol.. 297(3). 683-95 (2000)
• [Publications] Bijnens AP,Gils A,Knockaert I,Stassen JM,Declerck PJ.: "Importance of the hinge region between alpha-helix F and the main part of serpins, based upon identification of the epitope of plasminogen activator inhibitor type 1 neutralizing antibodies."J Biol Chem.. 275(9). 6375-80 (2000)
• [Publications] Vleugels N,Gils A,Bijnens AP,Knockaert I,Declerck PJ.: "The importance of helix F in plasminogen activator inhibitor-1."Biochim Biophys Acta.. 1476(1). 20-6 (2000)