1999 Fiscal Year Annual Research Report

カルシウム感受性ミオシンの構造と機能:モーター及び制御ドメインの発現と結晶化

Research Project

Project/Area Number	10044236
Research Institution	Gunma University, School of Medicine
Principal Investigator	小浜一弘群馬大学, 医学部, 教授 (30101116)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	中村彰男群馬大学, 医学部, 助手 (30282388) 岡垣壮群馬大学, 医学部, 講師 (80185412)
Keywords	ミオシン / カルシウム結合 / モーター・ドメイン / 発現蛋白質 / 粘菌 / 結晶化
Research Abstract	ミオシンは代表的な生物分子モーターであり、細胞内情報伝達系の最終的な担い手のひとつである。その構造と機能の理解にはモーター機能部位(制御部位を含む)を組換体発現蛋白質として得る事がカギとなっている。その理由は、i)分子生物学上の変異をかけた上で蛋白質化学的な解析が可能となるうえ、ii)結晶化により、高分解能で立体構造の決定を試みるだけの蛋白量が得られるからである。ところが、この部位を機能を維持したかたちで発現させるのは難しく、下等有核生物・ディクチオステリウム及び脊椎動物・平滑筋で成功しているにすぎない。これらのミオシンやリン酸化による制御を受けるタイプに属する。私どもの関心のある、Ca^<2+>結合により制御をうけるタイプのミオシンについては未だ成功していない。本年度はこのような実験計画のもと昨年に引きつづき制御ドメインに関する実験を行い、これまでの生化学的実験と比較検討した。 1)フィザルム・ミオシンの必須軽鎖と制御軽鎖も同様に大腸菌による発現蛋白質として得た。 2)フィザルムのpoly(A)RNAよりのcDNAを利用し、フィザルムミオシン重鎖の塩基配列を決定した。 3)フィザルムミオシン制御ドメインを構成する重鎖部分を大腸菌内に発現させた。 4)1)で得られた軽鎖を3)に組込み、Ca^<2+>結合をしらべた。 5)カルシウム結合性をもつ必須軽鎖に変異をかけCa^<2+>結合をしらべた。4)と合せ、Ca結合ドメイン1の重要性がみつかった。

Research Products

(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Kishi,H. et al: "Stable transfectants of smooth muscle cell line lacking the expression of myosin light chain kinase and their characterization with respect to the actomyosin system"J.Biol.Chem.. 275. 1414-1420 (2000)
[Publications] Ye,L.-H. et al: "Myoshin light-chain kinase of smooth muscle stimulats myosin ATPase activity without phosphorylating myosin light chain"Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.. 96. 6666-6671 (1999)
[Publications] Fujita,K. et al: "Myoshin light chain kinase from skletal muscle regulates an ATP-dependent interaction between actin and myosin by binding to actin"Mol.Cell Biol.. 190. 85-90 (1999)
[Publications] Nakamura,A. et al: "Calcium regulation of the actin-myosin interaction of Physarum polycephalum"Int.Rev.Of Cytol.. 19. 53-98 (1999)
[Publications] Hayakawa,K. et al: "Characterization of the myosin light chain kinase from smooth muscle as an actin-binding protein that assembles actin filament in vitro"Biochim.Biophys.Acta. 1450. 12-24 (1999)
[Publications] Iwasaki,W. et al: "Crystallization and preliminary X-ray diffraction studies of a 40kDa calcium binding protein specifically expressed in plasmodia of physarum polycephalum"J.Biochem.. 126. 7-9 (1999)
[Publications] Kohama,K. and Sasaki,Y.: "Molecular mechanisms of smooth muscle contraction"R.G.Landes Company. 167 (1999)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

カルシウム感受性ミオシンの構造と機能:モーター及び制御ドメインの発現と結晶化

Principal Investigator

小浜 一弘 群馬大学, 医学部, 教授 (30101116)

Research Products

[Publications] Kishi,H. et al: "Stable transfectants of smooth muscle cell line lacking the expression of myosin light chain kinase and their characterization with respect to the actomyosin system"J.Biol.Chem.. 275. 1414-1420 (2000)

[Publications] Ye,L.-H. et al: "Myoshin light-chain kinase of smooth muscle stimulats myosin ATPase activity without phosphorylating myosin light chain"Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.. 96. 6666-6671 (1999)

[Publications] Fujita,K. et al: "Myoshin light chain kinase from skletal muscle regulates an ATP-dependent interaction between actin and myosin by binding to actin"Mol.Cell Biol.. 190. 85-90 (1999)

[Publications] Nakamura,A. et al: "Calcium regulation of the actin-myosin interaction of Physarum polycephalum"Int.Rev.Of Cytol.. 19. 53-98 (1999)

[Publications] Hayakawa,K. et al: "Characterization of the myosin light chain kinase from smooth muscle as an actin-binding protein that assembles actin filament in vitro"Biochim.Biophys.Acta. 1450. 12-24 (1999)

[Publications] Iwasaki,W. et al: "Crystallization and preliminary X-ray diffraction studies of a 40kDa calcium binding protein specifically expressed in plasmodia of physarum polycephalum"J.Biochem.. 126. 7-9 (1999)

[Publications] Kohama,K. and Sasaki,Y.: "Molecular mechanisms of smooth muscle contraction"R.G.Landes Company. 167 (1999)

小浜一弘群馬大学, 医学部, 教授 (30101116)