1999 Fiscal Year Annual Research Report

一酸化窒素合成酵素の電子伝達機構の解明

Research Project

Project/Area Number	10045076
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
Research Institution	Tokai University
Principal Investigator	中澤博江東海大学, 医学部, 教授 (20110885)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	石田英之東海大学, 医学部, 講師 (20222424) 一守康史東海大学, 医学部, 講師 (60184636)
Keywords	一酸化窒素 / NO合成酵素 / テトラバイオプテリン / アルギニン / ヘム鉄 / NADPH
Research Abstract	3種のNO合成酵素(nNOS、iNOS、eNOS)を用いて次の結果を得た。 1)電子のleakを測定するシステムの確率 a.BH_4は濃度依存性にO_2-・を生成しNOを減少させるが、本実験下ではBH_4→O_2→O_2-・生成の系は無視できる値であった。よってSOD非依存性下でNO gasを測定できた。 b.この実験条件下でNADPHとCitrullinを持続的に測定する事が出来た。NOSにNADPHを添加後NADPHが減少していくがこの減少カーブとCitrullinの生成カーブはmirror imageを示し、その反応はstoichiometricに説明できた。 c.NO電極を用いてこれらのNOSからのNO生成のタイムコースを詳細に測定出来ることが示せた。 d.電子leakについてはO_2-・測定はsuccinyl cytochrome c法を使用。H_2O_2はチオシアン酸鉄法を用いることとした。 2)電子伝達におけるCalmodulinの役割 a.Calmodulin binding siteのmutantを作成した結果、Calmodulinの結合によりFAD/FMNが外にむきだし、電子伝達速度が著明に増加することが分かった。 b.eNOSではCalmodulinはdimerizationに関与し、電子伝達速度を著しく低下させた。 c.NOSからの一次生成物質は、NOS gasではなくNO^-(Nitroxyl)であるという研究があり現在も議論のある所である。今回の電子伝達実験において、NOSからの"一次生成物質はNO gas"であることを示すことが出来た。これまでの研究者が"Nitroxyl"であるとした理由は、FAD/FAMによる阻害であった。

Research Products
(8 results)

All Other

All Publications (8 results)

[Publications] Ishida H: "Formation of planar and spiral Ca^<2+> waves inisolated cardiac myocytes"Biophys J. 77. 2114-2122 (1999)
[Publications] Ishida H: "District roles peroxynitrite and hydroxy radical in triggering stunned myocardium-like impairment of cardiac myocytes in vitro"Mok Cell Biochem. 198. 31-38 (1999)
[Publications] Hirabayasi H: "7-Nitroindazole attenuates nitrotyrosine formation in the early phase of cerebral ischemia-reperfusion in mice"Neuroscience Letters. 268. 111-113 (1999)
[Publications] Xiao-Shu Cheng: "Role of superpxide anion in the pathogenesis of cytokine-induced myocardial dysfunction in dogs in vivo"Cardiovasc Res. 42. 651-659 (1999)
[Publications] Tanaka A: "Branching patterns of intramural coronary vessels determined by microangiography using synchrotron radiation"Am J Physiol. 276. H2262-H2267 (1999)
[Publications] Mori H: "Synchrotron microangiography reveals configuration changes and to-and-fro flow in intramyocardinal vessels"Am J Physiol. 276. H429-H437 (1999)
[Publications] Genka C: "Visualization biphasic Ca2_+ difusion from cytosol to nucleus in contracting adult rat cardiac myocytes with an ultra-fast confocal imaging system"Cell Calcium. 25. 199-208 (1999)
[Publications] Murata M: "Leukemia inhibitory factor, a potent cardiac hypertrophic cytokine, enhances L-type Ca^<2+> current and [Ca^<2+>]I transient in cardiomyocytes"J Mol Cell Cardiol. 31. 237-245 (1999)

1999 Fiscal Year Annual Research Report

一酸化窒素合成酵素の電子伝達機構の解明

Principal Investigator

中澤 博江 東海大学, 医学部, 教授 (20110885)

Research Products

[Publications] Ishida H: "Formation of planar and spiral Ca^<2+> waves inisolated cardiac myocytes"Biophys J. 77. 2114-2122 (1999)

[Publications] Ishida H: "District roles peroxynitrite and hydroxy radical in triggering stunned myocardium-like impairment of cardiac myocytes in vitro"Mok Cell Biochem. 198. 31-38 (1999)

[Publications] Hirabayasi H: "7-Nitroindazole attenuates nitrotyrosine formation in the early phase of cerebral ischemia-reperfusion in mice"Neuroscience Letters. 268. 111-113 (1999)

[Publications] Xiao-Shu Cheng: "Role of superpxide anion in the pathogenesis of cytokine-induced myocardial dysfunction in dogs in vivo"Cardiovasc Res. 42. 651-659 (1999)

[Publications] Tanaka A: "Branching patterns of intramural coronary vessels determined by microangiography using synchrotron radiation"Am J Physiol. 276. H2262-H2267 (1999)

[Publications] Mori H: "Synchrotron microangiography reveals configuration changes and to-and-fro flow in intramyocardinal vessels"Am J Physiol. 276. H429-H437 (1999)

[Publications] Genka C: "Visualization biphasic Ca2_+ difusion from cytosol to nucleus in contracting adult rat cardiac myocytes with an ultra-fast confocal imaging system"Cell Calcium. 25. 199-208 (1999)

[Publications] Murata M: "Leukemia inhibitory factor, a potent cardiac hypertrophic cytokine, enhances L-type Ca^<2+> current and [Ca^<2+>]I transient in cardiomyocytes"J Mol Cell Cardiol. 31. 237-245 (1999)

中澤博江東海大学, 医学部, 教授 (20110885)