1998 Fiscal Year Annual Research Report

酸化的DNA障害を認識する高等真核生物由来の修復酵素

Research Project

Project/Area Number	10151233
Research Institution	Hiroshima University
Principal Investigator	井出博広島大学, 理学部, 教授 (30223126)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	寺東宏明広島大学, 理学部, 助手 (00243543)
Keywords	DNA損傷 / DNA修復酵素 / エンドヌクレアーゼ / チミングリコール / ホルムアミドビリミジン / hOGG1 / mNthl1
Research Abstract	本研究では,酸化的損傷に対する塩基除去修復酵素hOGG1ならびにmNthl1の生化学的な酵素特性解析を行い,原核生物のホモログとの機能的な相違を検討した. 1. 8-oxoGおよびme-Fapyを含むオリゴヌクレオチドを基質として,hOGG1およびFpgの両基質に対する活性と酵素パラメーターを調べた.8-oxoG,me-Fapyはともに両酵素の基質となることが示されたが,切断生成物は,hOGG1ではβ-脱離生成物であるのに対し,Fpgではβ,δ-脱離生成物であった.hOGG1の8-oxoGおよびme-Fapyに対するkcat,Kmは数倍程度異なったが,反応効率(kcat/Km)は同程度であった.Fpgでも同様な検討を行ったところ,hOGG1に比べ高いkcatが得られたが,基質特異性に関してはhOGG1と同様な結果が得られた.NaBH_4存在下,8-oxoGあるいはme-Fapyを含む基質とhOGG1,Fpgをインキュベートし,生成物をSDS-PAGEで分析した.その結果,両酵素で基質-酵素間のクロスリンク複合体の存在が確認された.これは,反応中間体として,酵素-基質間でSchiff baseが形成されることを示している. 2. 様々な損傷を含むオリゴヌクレオチド基質を用いてmNthl1と大腸菌ホモローグ(EndoIII)の基質認識の差を検討した.TGの立体異性体(5S,6R体と5R,6S体)に対する活性は,両酵素の間で有為な差は認められなかった.また,EndoIIIではTGとURに対する活性は同程度であったが,DHTに対する活性は著しく低く,TGの約1/15であった.mNthl1でもTGとURに対する活性は同程度であったが,DHTでは低かった.しかし,DHTに対する活性はEndoIIIの場合ほどの大きな差はなく,TGの1/2程度であった.

Research Products

(6 results)

All Other

All Publications (6 results)

[Publications] Suzuki T.: "Misincorporation of 2'-deoxyoxanosine 5'-triphosphate by DNA polymreases and its implication to mutagenesis." Biochemistry. 37. 11592-11598 (1998)
[Publications] Sarker A.H.: "Cloning and characterization of a mouse homologue (mNthl1) of Escherichia coli endonuclease III." Journal of Molecular Biology. 282. 761-774 (1998)
[Publications] Terato H.: "Novel modification of 5-formyluracil by cysteine derivatives in aqueous solution." Nucleosides Nucleotides. 17. 131-141 (1998)
[Publications] Asaeda A.: "Repair kinetics of abasic sites in mammalian cells selectively monitored by the aldehyde reactive prove (ARP)" Nucleosides Nucleotides. 17. 503-513 (1998)
[Publications] Asaeda A.: "Highly sensitive assay of abasic sites in mammalian cells.Optimization of aldehyde reactive prove (ARP) method." Analytica Chimica Acta. 365. 35-41 (1998)
[Publications] 井出博: "酸化的チミン損傷を含むDNAの調製とDNA修復酵素による認識" 環境変異原研究. 20. 761-774 (1998)

1998 Fiscal Year Annual Research Report

酸化的DNA障害を認識する高等真核生物由来の修復酵素

Principal Investigator

井出 博 広島大学, 理学部, 教授 (30223126)

Research Products

[Publications] Suzuki T.: "Misincorporation of 2'-deoxyoxanosine 5'-triphosphate by DNA polymreases and its implication to mutagenesis." Biochemistry. 37. 11592-11598 (1998)

[Publications] Sarker A.H.: "Cloning and characterization of a mouse homologue (mNthl1) of Escherichia coli endonuclease III." Journal of Molecular Biology. 282. 761-774 (1998)

[Publications] Terato H.: "Novel modification of 5-formyluracil by cysteine derivatives in aqueous solution." Nucleosides Nucleotides. 17. 131-141 (1998)

[Publications] Asaeda A.: "Repair kinetics of abasic sites in mammalian cells selectively monitored by the aldehyde reactive prove (ARP)" Nucleosides Nucleotides. 17. 503-513 (1998)

[Publications] Asaeda A.: "Highly sensitive assay of abasic sites in mammalian cells.Optimization of aldehyde reactive prove (ARP) method." Analytica Chimica Acta. 365. 35-41 (1998)

[Publications] 井出博: "酸化的チミン損傷を含むDNAの調製とDNA修復酵素による認識" 環境変異原研究. 20. 761-774 (1998)

井出博広島大学, 理学部, 教授 (30223126)