1998 Fiscal Year Annual Research Report
FAK族キナーゼCAKβと焦点接着局在Hic-5による細胞形態とJNKの調節機構
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10152251
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| Research Institution | Sapporo Medical University |
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Principal Investigator |
佐々木 輝捷 札幌医科大学, 医学部・附属がん研究所, 教授 (00045494)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
青砥 宏 札幌医科大学, 医学部・附属がん研究所, 助手 (30285001)
石埜 正穂 札幌医科大学, 医学部・附属がん研究所, 講師 (30232325)
佐々木 洋子 札幌医科大学, 医学部・附属がん研究所, 講師 (60045424)
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| Keywords | タンパク質チロシンキナーゼ / 核移行 / 焦点接着 / CAKβ / PYK2 / Hic-5 / SH2ドメイン / GFP |
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| Research Abstract |
1. CAKβ/PYK2は細胞質に細胞骨格に添って分布するが、A点変異CAKβは核にのみ局在し、核内タンパク質のチロシンリン酸化を促進した。COS細胞やCaco2細胞に野生型CAKβを発現すると、細胞の凝集が起こった。A点変異CAKβの発現では、発現量に差が無いにもかかわらず、細胞の凝集が起こらなかった。COS7細胞にGFP-CAKβを発現すると、発現タンパク質は細胞質に局在した。この細胞をLeptomycin Bの存在下に培養すると、GFP-CAKβは核に蓄積した。Hic-5は通常、焦点接着に局在するが、CAKβを共発現すると細胞質に存在するようになった。A点変異CAKβとの共発現では、一部のHic-5が核に見い出された。今後の研究により、CAKβの核における機能を明らかにしたい。2.Hic-5はそのTyr-60がCAKβによりチロシンリン酸化され、この部位にCskSH2ドメインが特異的に結合した。3.CAKβに結合するタンパク質を、酵母two-hybrid系を用いてクローン化した。4.補助金により購入した落射式蛍光読取装置は、CAKβおよびHic-5の変異体cDNAや発現vectorを調製する際に核酸の電気泳動分離像を記録する目的に、また、これらのタンパク質を電気泳動で分離した後、そのWestern-blot像を記録・保存する目的に使用した。
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[Publications] Ohba,T.: "Dot far-western blot analysis of relative binding affinities of the Src homology 3 domains of Efs and its related proteins." Analytical Biochemistry. 262・2. 185-192 (1998)
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[Publications] Ohba,T.: "Interction of two Proline-rich sequences of cell adhesion kinase β with SH3 domains of p130^<Cas> -related proteins and GTPase-activating protein, Graf." Biochem.J.330・3. 1249-1254 (1998)
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[Publications] Matsuya,M.: "Cell adhesion kinase β forms a complex with a new member, Hic-5, of proteins localized at focal adhesions." J.Biol.Chem.273・2. 1003-1014 (1998)
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[Publications] Mitaka,T.: "Restricted expression of cell adhesion kinase-β in rat tissues." Amer.J.Pathol.150・1. 267-281 (1997)
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[Publications] Ueki,K.: "Integrin-mediated signal transduction in cells lacking focal adhesion kinase p125^<FAK>." FFBS Letters. 432・3. 197-201 (1998)
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[Publications] Ishino,M.: "Identification of an Efs isoform that lacks the SH3 domain and chromosomal mapping of human Efs." Oncogene. 15・14. 1741-1745 (1997)
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[Publications] Sasaki,H.et al.(分担): "Cell adhesion kinaseβ(CAK β)forms a complex with a new member Hic-5, of proteins localized at focal adhesions. In “Cytoskeleton" and G-proteins in the regiation of Cancer edited by Noboru Kazumaki." Hokkaido University Medical Library Series, Vol.37, 184(3) (1998)
