DNA障害に伴う核内クロストーク及び遺伝子発現の分子機序を基盤にした治療法の開発

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10153267
• Research Institution: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• Principal Investigator: 河野 公俊 産業医科大学, 医学部, 教授 (00153479)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 野本 実 産業医科大学, 医学部, 講師 (00164749)
• Keywords: YB-1 / PCNA / P-gp / NF-Y / p53 / AP-2 / MOAT

Research Abstract

我々はこれまで、シスプラチン感受性を左右する転写因子としてYB-1を報告してきた。このYB-1に関して更に解析を進め、その分子機序としてDNA修復との関連を検討した。YB-1のcDNAを用いて大腸菌での発現を行い、プルダウンアッセイを行った。その結果YB-1がPCNAと直接結合することを見いだし、in vivoにおいても結合が確認された。このことはDNA修復にYB-1が関与していることを示す。またYB-1はDNA結合能を持つことから、DNA損傷を認識するか否かをゲルシフトアッセイにて解析した所、YB-1による修復関連蛋白をリクルートする可能性が示唆された。また臨床腫瘍におけるYB-1の発現とその標的遺伝子の発現の相関についても検討し、骨肉腫においてはYB-1の核内発現とP-gpの発現が相関すること2)、しかし大腸癌や甲状腺癌においては正常部より癌部で発現が高かった。しかしP-gp発現との相関はなかったものの、TopoIIαやPCNAとの発現には正の相関があり増殖マーカーとしての有用性が示された。シスプラチン耐性での耐性関連遺伝子として新たにABCトランスポータースーパーファミリーのcMOAT2/MRP3の全長cDNAを単離して報告した。現在ディファレンシャルハイプリダイゼーション法にて新たに3クローンを分離して解析を進めている。薬剤ストレス応答もしくはDNA損傷により誘導される遺伝子についてはその解析を終えつつあり中心的役割を果たす転写遺伝子について最終的な同定作業を進めている。候補としてNF-Y、CTF、AP-2、p53等が挙げられ、更にそれらのリン酸化やアセチル化が関与する可能性が高いと考えられる。シスプラチン耐性細胞で過剰発現している遺伝子群のプロモーター解析の結果については現在論文準備中である。

Research Products

• [Publications] Tomoko Ise: "Transcription factor Y-box binding protein 1 binds preferentially to cisplatin-modified DNA and interacts with proliferating cell muclear antigen" Cancer Res.59. 342-346 (1999)
• [Publications] Takeshi Uchiumi: "Isolation of a novel human canalicular multispecific organic anjon transporter,cMOAT2/MRP3,and its expression in cisplatin-resistant cancer cells with decreased ATP-dependent drug transport" Biochem.Biophys.Res.Commun.252. 103-110 (1998)
• [Publications] Yoshinao Oda: "Nuclear expression of YB-1 Protein correlates with P-Glycoprotein Expression in human osteosarcoma" Clin.Cancer Res.4. 2273-2277 (1998)
• [Publications] Ken-ichi Ito: "Clinical significance of the increased multidrug resistance-associated protein(MRP)gene expression in patients with primary breast cancer." Oncol.Res.10. 99-109 (1998)
• [Publications] Toshiya Tanaka: "Glutathione homeostasis in human hepatic cells:overexpression of γ-glutamylcysteine synthetase gene in cell lines resistant to buthionine sulfoximine,an inhibitor of glutathione synthesis" Biochem.Biophys.Res.Commun.246. 398-403 (1998)
• [Publications] Manabu Furukawa: "The role of an inverted CCAAT element in transcriptional activation of the human DNA topoisomerase IIα gene by heat shock" J.Biol.Chem.273・17. 10550-10555 (1998)
• [Publications] Takefumi Ohga: "Direct involvement of the Y-box binding protein YB-1 in genotoxic stress-induced activation of the human multidrug resistance 1 gene." J.Biol.Chem.273・11. 5997-6000 (1998)
• [Publications] Kiyoyuki Torigoe: "Localization of 67 exons a YAC conting spanning 1.5 Mb around the multidrug resistance gene region of human chromosome 7q21.1" Genomics. 49. 14-22 (1998)
• [Publications] Morimasa Wada: "Mutations in the canalicular multispecific organic anion transporter(cMOAT)gene,a novel ABC transporter,in patients with hyperbilirubinemia II/Dubin-Johnson syndrome." Hum.Mol.Genet.7・2. 203-207 (1998)
• [Publications] Satoshi Toh: "Genomic organization of the human Y-box protein(YB-1)gene." Gene. 206. 93-37 (1998)
• [Publications] 河野公俊: "内科学進歩のトピックス" 九州大学出版会, 394 (1998)