ヒトセントロメア領域特異的ヌクレオソーム高次構造の解析

1998 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 10159208
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 依田 欣哉 名古屋大学, 生物分子応答研究センター, 助手 (30126916)
• Keywords: ヒトセントロメア / CENP-A / CENP-B / αサテライトDNA / セントロメア特異的ヌクレオソーム / ジグザグモデル / in vitro再構成

Research Abstract

Woodcockによるジグザグヌクレオソームモデルに次のような特徴を与え、セントロメア特異的ヌクレオソームとして提唱した。(1)1αサテライトユニット=1ヌクレオソームユニット、(2)CENP-Bboxの配置=規則的(2merに一回)、(3)ヌクレオソーム構造のポジショニング(CENP-Bboxはリンカー部に位置する)、(4)CENP-Bは二量体を形成し、DNAをおりたたむ、(5)セントロメア特異的ヒストンH3=CENP-Aを含む。
このモデルを指導理念として実証的に実験を組み立て以下の結果を得た。(i)高品質の抗CENP-Aモノクローン抗体を作製した。(ii)オリゴレオソームを単離し免疫沈降法によってCENP-AとCENP-Bが同じオリゴヌクレオソーム上に存在することを証明した。この結果は、現在提唱しているモデルを支持する。(iii)CENP-A及びCENP-Bをバキュロヴィールス発現系によって発現し、精製した。ヌクレオソーム再構成系を構築しつつある。今後は、再構成系及びin vivo系を用いて、セントロメアヌクレオソーム構造の構造と機能を解明する。

Research Products

• [Publications] Kinya Yoda et al.: "In Vitro Assembly of the CENPB/α-satellite DNA/core histone cernplex:CENPB causes nucleosome bositioning" Genes to Cells. 3. 533-548 (1998)
• [Publications] Kinya Yoda et al.: "Centromere Specific Nucleosome S/rnetures in Hunam Cells:Study of CENP-A,the centronese jpecygic huione H3" Gurdor Research Conference on Molecular genetics. 1998 7月19〜23日. (1998)
• [Publications] T.Okazaki,K.Yoda et al.: "Human Centromere:Specific chnsmection orgonizatior and the alphord array competent to pnduee tuntinel ecntromss/kinetuchore thcueture" Third APUCB congress Abslracts. 8月24〜28. 18-18 (1998)
• [Publications] 安藤覚、依田欣哉: "ヒトセントロメア特異的ヌクレオソーム-in vivoヌクレオソームの単離" 第21回分子生物学会年会予稿集. 12月. 470-470 (1998)
• [Publications] 依田欣哉他: "セントロメア特異的ヌクレオソーム構造-in vitro再構成系の構築" 第21回分子生物学会年会予稿集. 12月. 470-470 (1998)