1998 Fiscal Year Annual Research Report
紫外線損傷DNAを特異的に認識する抗体分子の機能の改変
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10165201
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
森岡 弘志 北海道大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (20230097)
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| Keywords | 紫外線 / 損傷塩基 / (6-4)光産物 / オリゴヌクレオチド / バイオセンサー / Dewar型異性体 / 1本鎖抗体 |
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| Research Abstract |
以下に,今年度得られた新たな知見等の成果を示す.
(1) Dewar型異性体を特異的に認識するDEM-1抗体の可変領域部遺伝子のクローニングを行い,その塩基配列およびアミノ酸配列を決定した.重鎮(H鎖)中にシステイン残基の存在が確認された.(2) Dewar型異性体特異的1本鎖抗体(DEM1scFv抗体)遺伝子の構築(VH-linker-VL型およびVL-linker-VH型)および大腸菌システムによる大量調製を行った.天然型では活性を有するscFv抗体蛋白質を得ることはできなかったが,システインをセリンに置換した変異scFv抗体では活性を有していた.(3)バイオセンサー(BIAcore)を用いて,Dewar型異性体を含む合成オリゴヌクレオチドとの相互作用を速度論的に解析したところ,特異的な結合が観察され,結合速度定数kass,解離速度定数kdissならびに解離定数Kdが得られた.DEM1scFv(C47S)抗体の抗原アナログd4merに対するKd値は,2.5±0.2x10^<-7>(VH-linker-VL型),2.2±0.3x10^<-7>(VL-linker-VH型),抗原アナログd6merに対するKd値は,2,4±0.2x10^<-7>(VH-linker-VL型),2.7±0.5x10^<-7>(VL-linker-VH型)となった.DEM-1 Fabの抗原アナログd4merに対するKd値は,1.1±0.1x10^<-7>,抗原アナログd6merに対するKd値は,1.0±0.1x10^<-7>となった.以上のことから,scFv抗体はFab抗体同様の抗原結合特性を有していることが分かった.
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[Publications] Morioka,H.: "Antibodies specific for (6-4) DNA photoproducts: Cloning,antibody modeling and construction of a single-chain Fv derivative." Biochim.Biophys.Acta. 1385. 17-32 (1998)
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[Publications] Kai,M.: "A new drosophila ultraviolet light-damaged DNA recognition endonuclease that selectively nicks a(6-4)photoproduct site." Biochim.Biophys.Acta. 1397. 180-188 (1998)
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[Publications] Torizawa,T.: "^<31>P NMR study of the interactions between oligodeoxynucleotides containing (6-4) photoproduct and Fab fragments of monoclonal antibodies specific for (6-4) photoproduct." FEBS Lett.429. 157-161 (1998)
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[Publications] Kobayashi,H.: "The role of surface lysines in pyrimidine (6-4) pyrimidone photoproduct binding by a high-affinity antibody." Protein Eng.11. 1089-1092 (1998)
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[Publications] Kobayashi,H.: "Probing the Interaction between a high-affinity single-chain Fv and pyrimidine (6-4) pyrimidone photodimer by site-directed mutagenesis." Biochemistry. 38. 532-539 (1999)
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[Publications] Kobayashi,H.: "Effects of a high-affinty antibody fragment on DNA polymerase reactions near a(6-4)photoproduct site.Photochem." Photobiol.69. 226-230 (1999)
